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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 用基因组DNA扩增某个基因效率怎样？
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lu12306

新虫 (初入文坛)

[求助] 用基因组DNA扩增某个基因效率怎样？ 已有1人参与

最近一直在做提取DNA直接以DNA作为PCR模板扩增目的基因，设退货温度梯度，一直没扩增出来。郁闷呀！
这与提RNA反转录作PCR模板有什么区别吗？比如说扩增效率方面，是不是以含内含子的DNA为模板PCR效率低，难扩增。
还有就是就算以DNA为模板扩增出基因，是不是还得提RNA反转录扩增验证呀？
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1楼 2014-09-07 12:40:46
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eulota

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
lu12306(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-09-11 09:23:29
看你的题目回答：
基因组DNA扩增的效率取决于多个方面，但主要有：
1. 基因组的一级结构，比如GC含量，比如重复序列等都会极大影响扩增；
2. 基因组的长度，如果超过5k，则需要注意用比较好的一点的Taq酶进行扩增反应。

看你的内容回答：
通常来说，cDNA做模版肯定要效率高些，因为没有内含子，但两种方式的目的是完全不一样的，不知道你要做什么？
你说的用基因组扩增后还要用RNA验证，恕不知道你在表达什么，通常没有你这样的说法。
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2楼2014-09-11 08:20:48
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lu12306

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by eulota at 2014-09-11 08:20:48
看你的题目回答：
基因组DNA扩增的效率取决于多个方面，但主要有：
1. 基因组的一级结构，比如GC含量，比如重复序列等都会极大影响扩增；
2. 基因组的长度，如果超过5k，则需要注意用比较好的一点的Taq酶进行扩增 ...

我们老师让我以基因组为模板扩增目的基因，然后将构建表达载体，转化，遗传分析。我担心的是基因中有内含子，基因片段太大，不容易转化。我看的文献几乎都是以cDNA为模板克隆基因，只有一篇以基因组为模板，并且这篇还没有做出结果。我想问的是以基因组为模板扩增目的基因，然后将构建表达载体，转化，遗传分析，这样是否可行？
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3楼2014-09-11 14:49:02
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