应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » pcr实验中遇到的问题，求指导
51/1返回列表
查看: 1623  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

悠悠飘杨

新虫 (小有名气)

[求助] pcr实验中遇到的问题，求指导 已有3人参与

我的pcr实验每次都要p两次，才能得到想要的结果，请问这会不会对后续的克隆实验有影响？而且我的pcr结果总是不稳定，相同条件下不能得到一样的结果，请问这该怎么办？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-09-04 09:05:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

悠悠飘杨

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 哇哇乱叫 at 2014-09-04 13:55:23
就是引物的特异性太差了，pcr就那几个点容易出问题。大部分就是引物的问题，有时候pcr体系也会有影响，但是你每次读是一样的所以应该不是体系问题。

有一次p出来目的条带了，是做梯度pcr的时候，但是再做就得不到结果了
赞一下 回复此楼
7楼2014-09-04 13:58:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

huyan0817

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
悠悠飘杨(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-09-04 19:31:10
P两次很正常，只要是扩增条带与目标条带差不多，应该问题不大。至于不稳定我不知道楼主所谓的不稳定是指什么情况，可以说详细点！
赞一下 回复此楼
2楼2014-09-04 09:48:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

悠悠飘杨

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by huyan0817 at 2014-09-04 09:48:48
P两次很正常，只要是扩增条带与目标条带差不多，应该问题不大。至于不稳定我不知道楼主所谓的不稳定是指什么情况，可以说详细点！

就是同样的条件，再去做pcr，就得不到一样的结果，条带的位置都不一样，甚至都没有条带，而且杂带的位置也不一样
赞一下 回复此楼
3楼2014-09-04 10:22:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huyan0817

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
悠悠飘杨(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-09-04 19:31:20
引用回帖:
3楼: Originally posted by 悠悠飘杨 at 2014-09-04 10:22:55
就是同样的条件，再去做pcr，就得不到一样的结果，条带的位置都不一样，甚至都没有条带，而且杂带的位置也不一样...

你这个有点奇怪哦!有杂条带说明你引物有非特异性扩增,建议楼主把所有东西换一下,该灭菌的从新灭一次,模板少加点,跑电泳时候用1%胶及电压小点80V，PCR退火温度适当提高几度！
赞一下 回复此楼
4楼2014-09-04 13:22:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办？ +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 什么时候开奖？ +9 CrisMessi 2026-08-18 10/500 2026-08-23 12:03 by 丶昵称占用
[基金申请] 让我中一个面上吧！ +12 大萍1987 2026-08-20 14/700 2026-08-23 10:30 by wrm
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 5/250 2026-08-23 07:41 by OEbVnUOu01ol
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-21 10/500 2026-08-23 07:17 by OEbVnUOu01ol
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 7/350 2026-08-23 03:55 by OEbVnUOu01ol
[论文投稿] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 5/250 2026-08-23 03:52 by OEbVnUOu01ol
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 7/350 2026-08-23 03:43 by OEbVnUOu01ol
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 QTy3jDtz1uLt 2026-08-21 9/450 2026-08-23 03:04 by OEbVnUOu01ol
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +3 zjuhero 2026-08-22 4/200 2026-08-22 20:02 by mycsru
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +24 yaoyewhu2008 2026-08-20 26/1300 2026-08-22 17:43 by kammury
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +13 ziyangfang 2026-08-19 16/800 2026-08-22 17:08 by WH3796
[基金申请] 人气不行了 +8 fansofjerry 2026-08-21 8/400 2026-08-22 16:30 by zyqchem
[基金申请] 科研孤儿太难了 +17 我4大白菜 2026-08-20 18/900 2026-08-21 20:57 by zhangev
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +7 angus9576 2026-08-17 12/600 2026-08-21 13:38 by weiyin
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧？ +4 哈哈蛤？ 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 今天系统多次维护，明天很可能放榜！ +10 zju2000 2026-08-16 11/550 2026-08-20 20:02 by cl479861084
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭