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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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悠悠飘杨

新虫 (小有名气)

[求助] pcr实验中遇到的问题,求指导 已有3人参与

我的pcr实验每次都要p两次,才能得到想要的结果,请问这会不会对后续的克隆实验有影响?而且我的pcr结果总是不稳定,相同条件下不能得到一样的结果,请问这该怎么办?
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悠悠飘杨

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by huyan0817 at 2014-09-04 13:22:33
你这个有点奇怪哦!有杂条带说明你引物有非特异性扩增,建议楼主把所有东西换一下,该灭菌的从新灭一次,模板少加点,跑电泳时候用1%胶及电压小点80V,PCR退火温度适当提高几度!...

我在想会不会是引物的问题,引物的特异性不够好
5楼2014-09-04 13:52:40
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huyan0817

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
悠悠飘杨(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-09-04 19:31:10
P两次很正常,只要是扩增条带与目标条带差不多,应该问题不大。至于不稳定我不知道楼主所谓的不稳定是指什么情况,可以说详细点!
2楼2014-09-04 09:48:48
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悠悠飘杨

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by huyan0817 at 2014-09-04 09:48:48
P两次很正常,只要是扩增条带与目标条带差不多,应该问题不大。至于不稳定我不知道楼主所谓的不稳定是指什么情况,可以说详细点!

就是同样的条件,再去做pcr,就得不到一样的结果,条带的位置都不一样,甚至都没有条带,而且杂带的位置也不一样
3楼2014-09-04 10:22:55
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huyan0817

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


悠悠飘杨(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-09-04 19:31:20
引用回帖:
3楼: Originally posted by 悠悠飘杨 at 2014-09-04 10:22:55
就是同样的条件,再去做pcr,就得不到一样的结果,条带的位置都不一样,甚至都没有条带,而且杂带的位置也不一样...

你这个有点奇怪哦!有杂条带说明你引物有非特异性扩增,建议楼主把所有东西换一下,该灭菌的从新灭一次,模板少加点,跑电泳时候用1%胶及电压小点80V,PCR退火温度适当提高几度!
4楼2014-09-04 13:22:33
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