24小时热门版块排行榜    

查看: 1380  |  回复: 7
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

Tina爱睡觉

新虫 (初入文坛)

[求助] 扩增不出目的条带 已有3人参与

本人新手,RNA反转录成cDNA,并以cDNA为模板进行目的基扩增,大约1200bp。已经用内参引物检测了cDNA没问题,也做了48-60℃的温度梯度,但是始终没有扩增出目的条带。用的酶是primer star,体系为模板1,引物1,buffer5,dntp2,水15,酶1,程序为95℃ 1min,95℃ 30sec,55℃ 30sec,68℃ 2min,68℃ 5min,循环数35。求高人指点
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

优越感,不安全感,自控力
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Tina爱睡觉

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by hongqifei at 2014-09-02 22:03:18
Taraka公司的primestar DNA聚合酶的PCR条件不是你这样的,详情你可以查一下说明书。建议你先做一次98度变性10s、55度退火15s、72度延伸1m20s条件看看。如果扩不出,改为98度变性10s、68度延伸1m20s(两步法)。如果 ...

已经换过其他的酶,都没有扩增出来。现在出现的问题是偶尔能扩增出来,但不能重复
优越感,不安全感,自控力
7楼2014-09-09 16:00:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

huay13

铜虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
解链时间长点试试,95度 2min
食品是个坑
2楼2014-09-02 21:51:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hongqifei

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
gyesang: 金币+3, 应助指数+1, 鼓励回帖交流! 2014-09-03 18:17:20
Taraka公司的primestar DNA聚合酶的PCR条件不是你这样的,详情你可以查一下说明书。建议你先做一次98度变性10s、55度退火15s、72度延伸1m20s条件看看。如果扩不出,改为98度变性10s、68度延伸1m20s(两步法)。如果还扩不出,改用GC buffer或换引物或换其他高保真DNA聚合酶。
何须剑道争锋?千人指,万人封,可问江湖鼎峰,三尺秋水尘不染,天下无双。
3楼2014-09-02 22:03:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

youlizujuan

新虫 (小有名气)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-09-03 18:17:29
phusion高保真聚合酶 楼主可以试试 不打广告
4楼2014-09-03 17:21:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求调剂院校信息 +4 CX 330 2026-03-21 4/200 2026-03-21 23:48 by ms629
[考研] 085600材料与化工306 +4 z1z2z3879 2026-03-21 4/200 2026-03-21 23:44 by ms629
[考研] 一志愿西安交通大学材料工程专业 282分求调剂 +10 枫桥ZL 2026-03-18 12/600 2026-03-21 22:02 by peike
[考研] 考研化学学硕调剂,一志愿985 +5 张vvvv 2026-03-15 7/350 2026-03-21 19:23 by ColorlessPI
[考研] 求调剂 +4 要好好无聊 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:57 by 学员8dgXkO
[考研] 材料工程专硕 348分求调剂 +3 冬辞. 2026-03-17 5/250 2026-03-21 18:47 by 学员8dgXkO
[考研] 工科0856求调剂 +3 沐析汀汀 2026-03-21 3/150 2026-03-21 18:30 by 学员8dgXkO
[考研] 生物学一志愿985,分数349求调剂 +3 zxts12 2026-03-21 3/150 2026-03-21 16:34 by 33来了真来了
[考研] 一志愿华中科技大学071000,求调剂 +3 沿岸有贝壳6 2026-03-21 3/150 2026-03-21 10:35 by 暮云清寒
[考研] 一志愿山大07化学 332分 四六级已过 本科山东双非 求调剂! +3 不想理你 2026-03-16 3/150 2026-03-21 03:59 by JourneyLucky
[考研] 299求调剂 +6 △小透明* 2026-03-17 6/300 2026-03-21 02:42 by JourneyLucky
[考研] 化学求调剂 +4 临泽境llllll 2026-03-17 5/250 2026-03-21 02:23 by JourneyLucky
[考研] 一志愿重庆大学085700资源与环境专硕,总分308求调剂 +3 墨墨漠 2026-03-18 3/150 2026-03-21 00:39 by JourneyLucky
[考研] 一志愿中海洋材料工程专硕330分求调剂 +8 小材化本科 2026-03-18 8/400 2026-03-20 23:16 by JourneyLucky
[考研] 330求调剂 +4 小材化本科 2026-03-18 4/200 2026-03-20 23:13 by JourneyLucky
[考研] 329求调剂 +9 想上学吖吖 2026-03-19 9/450 2026-03-20 22:01 by luoyongfeng
[考研] 295复试调剂 +8 简木ChuFront 2026-03-19 8/400 2026-03-20 20:44 by zhukairuo
[考研] 材料学求调剂 +4 Stella_Yao 2026-03-20 4/200 2026-03-20 20:28 by ms629
[考研] 广西大学家禽遗传育种课题组2026年硕士招生(接收计算机专业调剂) +3 123阿标 2026-03-17 3/150 2026-03-20 15:58 by 飞行琦
[考研] 070303 总分349求调剂 +3 LJY9966 2026-03-15 5/250 2026-03-16 14:24 by xwxstudy
信息提示
请填处理意见