应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 扩增不出目的条带
81/1返回列表
查看: 1666  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

Tina爱睡觉

新虫 (初入文坛)

[求助] 扩增不出目的条带 已有3人参与

本人新手，RNA反转录成cDNA，并以cDNA为模板进行目的基扩增，大约1200bp。已经用内参引物检测了cDNA没问题，也做了48-60℃的温度梯度，但是始终没有扩增出目的条带。用的酶是primer star，体系为模板1，引物1，buffer5，dntp2，水15，酶1，程序为95℃ 1min，95℃ 30sec，55℃ 30sec，68℃ 2min，68℃ 5min，循环数35。求高人指点
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
优越感，不安全感，自控力
1楼 2014-09-02 19:25:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huay13

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
解链时间长点试试，95度 2min
赞一下 回复此楼
食品是个坑
2楼2014-09-02 21:51:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hongqifei

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+3, 应助指数+1, 鼓励回帖交流！ 2014-09-03 18:17:20
Taraka公司的primestar DNA聚合酶的PCR条件不是你这样的，详情你可以查一下说明书。建议你先做一次98度变性10s、55度退火15s、72度延伸1m20s条件看看。如果扩不出，改为98度变性10s、68度延伸1m20s（两步法）。如果还扩不出，改用GC buffer或换引物或换其他高保真DNA聚合酶。
赞一下 回复此楼
何须剑道争锋？千人指，万人封，可问江湖鼎峰，三尺秋水尘不染，天下无双。
3楼2014-09-02 22:03:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

youlizujuan

新虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-09-03 18:17:29
phusion高保真聚合酶 楼主可以试试 不打广告
赞一下 回复此楼
4楼2014-09-03 17:21:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-09-10 09:02:40
可以尝试加大模板的量的到5ul再扩增试试
赞一下 回复此楼
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
5楼2014-09-03 18:18:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yeast140208

新虫 (初入文坛)
变性温度可以提到2到3分钟  第二步可以把时间定在15秒
赞一下 回复此楼
6楼2014-09-03 20:18:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Tina爱睡觉

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by hongqifei at 2014-09-02 22:03:18
Taraka公司的primestar DNA聚合酶的PCR条件不是你这样的，详情你可以查一下说明书。建议你先做一次98度变性10s、55度退火15s、72度延伸1m20s条件看看。如果扩不出，改为98度变性10s、68度延伸1m20s（两步法）。如果 ...

已经换过其他的酶，都没有扩增出来。现在出现的问题是偶尔能扩增出来，但不能重复
赞一下 回复此楼
优越感，不安全感，自控力
7楼2014-09-09 16:00:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Tina爱睡觉

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by gyesang at 2014-09-03 18:18:05
可以尝试加大模板的量的到5ul再扩增试试

梯度做过，模板加到了3ul、没有条带
赞一下 回复此楼
优越感，不安全感，自控力
8楼2014-09-09 16:02:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 Tina爱睡觉 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 5/250 2026-08-23 15:18 by KM5EcsNQRBPn
[公派出国] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-21 6/300 2026-08-23 14:45 by KM5EcsNQRBPn
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 h4CP7TrQR8Lg 2026-08-22 5/250 2026-08-23 12:09 by LR9qGULyN2ew
[基金申请] 什么时候开奖？ +9 CrisMessi 2026-08-18 10/500 2026-08-23 12:03 by 丶昵称占用
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +15 羊腰板 2026-08-21 16/800 2026-08-23 10:45 by process2012
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-21 10/500 2026-08-23 07:17 by OEbVnUOu01ol
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 DpSrDtM079iu 2026-08-22 5/250 2026-08-23 04:07 by OEbVnUOu01ol
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 7/350 2026-08-23 03:55 by OEbVnUOu01ol
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 7/350 2026-08-23 03:43 by OEbVnUOu01ol
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 QTy3jDtz1uLt 2026-08-21 9/450 2026-08-23 03:04 by OEbVnUOu01ol
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 DpSrDtM079iu 2026-08-22 3/150 2026-08-23 00:55 by OEbVnUOu01ol
[教师之家] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 2JOx3r2CYEgw 2026-08-21 4/200 2026-08-22 16:52 by sunzitan
[基金申请] 人气不行了 +8 fansofjerry 2026-08-21 8/400 2026-08-22 16:30 by zyqchem
[基金申请] 时间戳今天，20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 看来今天不会放榜了？ +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +7 angus9576 2026-08-17 12/600 2026-08-21 13:38 by weiyin
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 今天系统多次维护，明天很可能放榜！ +10 zju2000 2026-08-16 11/550 2026-08-20 20:02 by cl479861084
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭