应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 实验室分析、仪器 » 第一次跑自己DIY的不正宗的SDS-PAGE梯度胶，请大侠提提改进的方法！跪谢~
51/1返回列表
查看: 3040  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

钢琴兔

银虫 (小有名气)

[求助] 第一次跑自己DIY的不正宗的SDS-PAGE梯度胶，请大侠提提改进的方法！跪谢~ 已有3人参与

泳道1至4是不同美拉德接枝时间的蛋白质，5是未接枝的蛋白质，后5道是一样的平行。
拖尾和背景好严重啊，而且未接枝的蛋白条带还是波浪型的。
分离胶浓度为16%到11%，浓缩胶为5%，电压分别是120V和80V，实验室没有梯度混合器，我自己做了5层不同浓度的分离胶加的。
求大神指点指点，背景好深是什么原因。
我蛋白质样品加了含β-巯基乙醇的上样缓冲液后100℃煮沸5min，再离心10000r/min,10min,  吸取上部分10微升上样的，是我浓度太大还是什么原因呐~
请大家不吝赐教！！也欢迎正在跑SDS-PAGE的童鞋交流交流！

第一次跑自己DIY的不正宗的SDS-PAGE梯度胶，请大侠提提改进的方法！跪谢~
脱酰胺蛋白 美拉德 原始 3.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-09-01 22:03:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

钢琴兔

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 答非所问 at 2014-09-01 23:54:07
背景深的话，可能是由于你的脱色不够完全，建议你继续脱色，试试看
还有你跑浓缩胶的电压要比我的高，我的电压时60v这样的话，可能导致你的条带不平。。。

脱色蛮久了，还是这样的，以前帮师兄师姐跑过，没这么严重的背景。以前用的一直都是80V-120V, 跑出过好看的条带，现在自己的电泳跑得很差，不知道是不是和我DIY的胶有关，但是搞不懂背景很深，类似拖尾的情况。
还是谢谢你~
赞一下 回复此楼
3楼2014-09-02 07:51:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

答非所问

荣誉版主 (职业作家)

ET.....

优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
钢琴兔: 金币+10, ★有帮助 2014-09-02 07:51:00
背景深的话，可能是由于你的脱色不够完全，建议你继续脱色，试试看
还有你跑浓缩胶的电压要比我的高，我的电压时60v这样的话，可能导致你的条带不平。。。
赞一下 回复此楼
获取网盘密码请点击：http://emuch.net/bbs/box.php（复制之后，黏贴到浏览器地址栏）
2楼2014-09-01 23:54:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

SPMMP

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
在做梯度胶之前先将普通胶的电泳跑好，技术熟练后再做难的。一般来说，做梯度胶必须有梯度混合器的，这样才有浓度梯度的连续性。
赞一下 回复此楼
4楼2014-09-02 08:09:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

答非所问

荣誉版主 (职业作家)

ET.....

优秀版主
我们一般DIY，我没有自己用过现成的，你们那边有没有人做TGGE或者DGGE的，他们肯定有梯度混合器，最好还是做出想要的效果
赞一下 回复此楼
获取网盘密码请点击：http://emuch.net/bbs/box.php（复制之后，黏贴到浏览器地址栏）
5楼2014-09-02 08:47:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[有机交流] OpenAI又攻克数学难题了，离AI做有机合成还有多远？ +4 wangyl_123 2026-10-10 7/350 2026-10-12 14:47 by chuans0923
[公派出国] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:34 by XQNyDCa1Tk5n
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:15 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 22:11 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:06 by XQNyDCa1Tk5n
[基金申请] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:06 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 14:25 by VOMexwnDzOFZ
[教师之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 (EPI+-1)(金币-50) +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 14:05 by VOMexwnDzOFZ
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:51 by VOMexwnDzOFZ
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:45 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:54 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:34 by VOMexwnDzOFZ
[考博] 招收博士生一名 +3 mandolin 2026-10-10 3/150 2026-10-11 10:21 by 不是山谷！
[教师之家] 课题组会帮你通过考核么？ +3 好运来～9527 2026-10-10 5/250 2026-10-11 09:00 by 好运来～9527
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 4/200 2026-10-11 03:14 by M0zrYVSAnxpE
[有机交流] 各位大佬，路线设计求助 +6 zapen 2026-10-08 8/400 2026-10-10 15:59 by zapen
[基金申请] 入职后第一次管课题组的专利缴费，对账才发现官费比别人多掏了一倍 +5 13108017953 2026-10-08 5/250 2026-10-10 11:15 by wdwd123
[有机交流] 我应该选哪条合成路线让实验成功率高一些？ +5 jing816y 2026-10-08 9/450 2026-10-10 09:05 by zapen
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭