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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » gfp pcr疑问
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wangxl722008

铁杆木虫 (著名写手)

[求助] gfp pcr疑问已有2人参与

载体构建过程pcr，用pGWB406载体，gfp引物，空载406菌液提取质粒用gfp引物能p出条带，但空载406菌液却什么也p不出来。我的基因转化后菌液pcr能p出条带，但大小比gfp大小大了100多bp，测序后发现和gfp序列差距太大。不知道为什么？
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1楼2014-09-01 17:21:31
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zhaodahe

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by wangxl722008 at 2014-09-01 19:32:41
应该不是。我提高退火温度，是单一条带，大小也差不多，应该对的。...

406带GFP基因？你的目的是把哪个基因连到406上，不是GFP吗？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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4楼2014-09-01 19:39:12
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zhaodahe

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wangxl722008: 金币+10, ★有帮助 2014-09-01 21:38:19
空载体406质粒做模版能扩增出条带，是非特异的吧？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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2楼2014-09-01 19:15:41
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wangxl722008

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zhaodahe at 2014-09-01 19:15:41
空载体406质粒做模版能扩增出条带，是非特异的吧？

应该不是。我提高退火温度，是单一条带，大小也差不多，应该对的。
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3楼2014-09-01 19:32:41
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wangxl722008

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by zhaodahe at 2014-09-01 19:39:12
406带GFP基因？你的目的是把哪个基因连到406上，不是GFP吗？
...

是的，406自带gfp基因。
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5楼2014-09-01 21:37:31
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