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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » gfp pcr疑问
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wangxl722008

铁杆木虫 (著名写手)

[求助] gfp pcr疑问 已有2人参与

载体构建过程pcr，用pGWB406载体，gfp引物，空载406菌液提取质粒用gfp引物能p出条带，但空载406菌液却什么也p不出来。我的基因转化后菌液pcr能p出条带，但大小比gfp大小大了100多bp，测序后发现和gfp序列差距太大。不知道为什么？
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1楼 2014-09-01 17:21:31
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zhaodahe

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wangxl722008: 金币+10, ★有帮助 2014-09-01 21:38:19
空载体406质粒做模版能扩增出条带，是非特异的吧？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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2楼2014-09-01 19:15:41
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wangxl722008

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zhaodahe at 2014-09-01 19:15:41
空载体406质粒做模版能扩增出条带，是非特异的吧？

应该不是。我提高退火温度，是单一条带，大小也差不多，应该对的。
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3楼2014-09-01 19:32:41
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zhaodahe

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by wangxl722008 at 2014-09-01 19:32:41
应该不是。我提高退火温度，是单一条带，大小也差不多，应该对的。...

406带GFP基因？你的目的是把哪个基因连到406上，不是GFP吗？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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4楼2014-09-01 19:39:12
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wangxl722008

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by zhaodahe at 2014-09-01 19:39:12
406带GFP基因？你的目的是把哪个基因连到406上，不是GFP吗？
...

是的，406自带gfp基因。
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5楼2014-09-01 21:37:31
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zhaodahe

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

被你搞乱了，那你目的基因不是gfp，大小比gfp大不是很正常吗？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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6楼2014-09-01 22:25:37
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wopopwz123

捐助贵宾 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wangxl722008: 金币+10, ★有帮助, 多谢。 2014-09-02 08:59:30
绿色荧光蛋白基因GFP这个基因的退火温度我们摸索过，一般在60-62度都可以扩增出来，你改一下条件试试。
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7楼2014-09-01 23:46:56
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wangxl722008

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by wopopwz123 at 2014-09-01 23:46:56
绿色荧光蛋白基因GFP这个基因的退火温度我们摸索过，一般在60-62度都可以扩增出来，你改一下条件试试。

多谢，我用的是58度。我试一下。
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8楼2014-09-02 08:59:13
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wangxl722008

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by zhaodahe at 2014-09-01 22:25:37
被你搞乱了，那你目的基因不是gfp，大小比gfp大不是很正常吗？

我不是p我的基因，我是p的gfp基因。
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9楼2014-09-02 09:01:31
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cong葱

铜虫 (小有名气)
看见大家的评论 小妹也有一些问题 望大家指点一下 我做农杆菌转化 把含GFP的质粒转到丝状真菌里 但做验证的时候发现野生菌里也可以扩出GFP的 片段 不知为什么？
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10楼2014-09-03 20:37:48
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