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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » gfp pcr疑问
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wangxl722008

铁杆木虫 (著名写手)

[求助] gfp pcr疑问 已有2人参与

载体构建过程pcr，用pGWB406载体，gfp引物，空载406菌液提取质粒用gfp引物能p出条带，但空载406菌液却什么也p不出来。我的基因转化后菌液pcr能p出条带，但大小比gfp大小大了100多bp，测序后发现和gfp序列差距太大。不知道为什么？
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1楼 2014-09-01 17:21:31
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cong葱

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by zeroon at 2014-09-03 21:09:02
哇，找到同样的小伙伴了，我后面实验也要把GPF放在丝状真菌中表达，做定位用的。想问问，你用农杆菌转的时候，液体共培养需要注意哪些方面啊？我之前做过两次，都失败了。我用的孢子和农杆菌共培养的。...

就是把养好的农杆菌和做的孢子悬浮液混合到一起 然后涂到玻璃纸上
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12楼2014-09-04 07:47:44
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zhaodahe

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wangxl722008: 金币+10, ★有帮助 2014-09-01 21:38:19
空载体406质粒做模版能扩增出条带，是非特异的吧？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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2楼2014-09-01 19:15:41
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wangxl722008

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zhaodahe at 2014-09-01 19:15:41
空载体406质粒做模版能扩增出条带，是非特异的吧？

应该不是。我提高退火温度，是单一条带，大小也差不多，应该对的。
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3楼2014-09-01 19:32:41
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zhaodahe

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by wangxl722008 at 2014-09-01 19:32:41
应该不是。我提高退火温度，是单一条带，大小也差不多，应该对的。...

406带GFP基因？你的目的是把哪个基因连到406上，不是GFP吗？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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4楼2014-09-01 19:39:12
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