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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 一种革兰氏阴性野生菌的感受态制备，请教关键环节！
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charles08

铁杆木虫 (著名写手)

[求助] 一种革兰氏阴性野生菌的感受态制备，请教关键环节！ 已有2人参与

最近在制备革兰氏阴性菌的感受态细胞，做了4-5次了，依然没有成功。都是按分子克隆上的操作来的

化学转化后始终得不到阳性转化子，发现这种野生菌株真难转化

但是这还是一种革兰氏阴性细菌，应该是比较好做的啊，
请教各位

有经验的可以介绍介绍，到底制备野生菌株的时候需要注意哪些关键环节
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1楼 2014-08-30 12:03:12
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清风徐来111

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
charles08(kx444555代发): 金币+3, 鼓励交流 2014-09-02 20:21:54
不同细菌的敏感性都不一样的，对于野生菌的转化从来就是创新性的题目，遇到困难并不奇怪。
有的野生菌自身具有修复系统，外源的DNA会被清除掉的。建议尝试分离、改造并使用其自身具有的质粒进行转化。
建议尝试一下电击法。曾经有一个同事做革兰氏阴性厌氧菌转化，只有用电击法才能够获得很低的转化效率，尝试的其他方法均失败。
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2楼2014-09-02 10:53:16
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charles08

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 清风徐来111 at 2014-09-02 10:53:16
不同细菌的敏感性都不一样的，对于野生菌的转化从来就是创新性的题目，遇到困难并不奇怪。
有的野生菌自身具有修复系统，外源的DNA会被清除掉的。建议尝试分离、改造并使用其自身具有的质粒进行转化。
建议尝试一 ...

非常感谢，您和您的同事也曾经做过这个方面的研究吗》
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3楼2014-09-02 12:31:00
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charles08

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 清风徐来111 at 2014-09-02 10:53:16
不同细菌的敏感性都不一样的，对于野生菌的转化从来就是创新性的题目，遇到困难并不奇怪。
有的野生菌自身具有修复系统，外源的DNA会被清除掉的。建议尝试分离、改造并使用其自身具有的质粒进行转化。
建议尝试一 ...

如果您也做过，能否推荐些关键文献，谢谢

不好意思，虽然知道自己也可以检索，但是时间确实很感，老板催了
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4楼2014-09-02 12:34:11
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清风徐来111

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by charles08 at 2014-09-02 12:34:11
如果您也做过，能否推荐些关键文献，谢谢

不好意思，虽然知道自己也可以检索，但是时间确实很感，老板催了...

本人没有做过，也是很久以前的同事做过，现在也没有再联系了，不好意思。
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5楼2014-09-03 09:02:23
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zhangbighui

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

电击法是比较快的，相关的操作的注意事项你在木虫里找一下，有的是
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成功，就是成为你想成为的人
6楼2014-09-03 14:22:20
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charles08

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by zhangbighui at 2014-09-03 14:22:20
电击法是比较快的，相关的操作的注意事项你在木虫里找一下，有的是

好的
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7楼2014-09-04 11:11:59
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