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shxteacher

铁杆木虫 (正式写手)

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[交流] PYD1重组质粒转化酿酒酵母后为什么长出的阳性斑PCR扩不出目的片段？已有1人参与

跟别人交换了pYD1酿酒酵母质粒，按照pYD1的操作手册，将目的基因连接至pYD1，构建好了重组质粒，并测序验证正确。
然后木有线性化（根据操作手册中的描述，不需要线性化），直接转入EBY100酿酒酵母感受态细胞中，
用Trp-（色氨酸缺陷）平板筛选，能长出粉色菌落，本人不知道是否正确？但是EBY100感受态细胞无法在trp-平板上长出菌落。
然后挑取单菌落，转至trp-液体培养基中培养，培养物离心后，依旧是粉色培养物。
但是用试剂盒提取基因组后，却无法PCR得到我目的基因片段，为什么PCR不出来？
（pYD1酿酒酵母质粒和 EBY100均是跟别人换来的）
不知道各位科研同仁遇到这样的情况木有？
请各位大虾给点指点，实在想不通，万分感谢。

pYD1重组质粒转化后的粉色菌落.png

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