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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 请问一个PCR连接的问题
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王丹523

铁虫 (小有名气)

[求助] 请问一个PCR连接的问题 已有5人参与

我们实验室有两种连接试剂盒 ， 普洛麦格的t easy 和Takara pu19
我平时用普洛麦格的 ，  但是因为buffer是2*的 ，有时候没办法， 就在连接的时候用Takara的连接酶和连接buffer （他们是10*）的 质粒还是用的普洛麦格的t easy
这样可以吗
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1楼 2014-08-27 15:46:00
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
王丹523(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-08-27 18:56:52
载体可以用试剂盒里的，连接酶和buffer可以不用里面的。
你的可以
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2楼2014-08-27 16:16:30
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trizol11

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
王丹523(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-08-27 18:57:05
王丹523: 金币+3 2014-09-01 23:21:31
我觉得试剂盒的BUFFER还有其他稀释液最好用同一批号的。混用时有一定的影响。我在做链接的时候就不混用试剂。里面的试剂缺乏要重新定制。个人建议，
赞一下(1人) 回复此楼
任重道远……
3楼2014-08-27 16:46:09
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王丹523

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-08-27 16:16:30
载体可以用试剂盒里的，连接酶和buffer可以不用里面的。
你的可以

谢谢
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4楼2014-08-27 18:34:08
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王丹523

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by trizol11 at 2014-08-27 16:46:09
我觉得试剂盒的BUFFER还有其他稀释液最好用同一批号的。混用时有一定的影响。我在做链接的时候就不混用试剂。里面的试剂缺乏要重新定制。个人建议，

谢谢你的建议
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5楼2014-08-27 18:34:36
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sarah-miao

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
楼上正解，建议同一批次的，不要混合使用，不利于连接反应
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6楼2014-08-28 10:02:36
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 王丹523 at 2014-08-27 18:34:08
谢谢...

不客气
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7楼2014-08-28 15:50:15
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qazwer

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-08-28 21:22:06
不可以的，不同的酶对应不同的buffer，酶的连接效率也相应地改变甚至起不到连接的作用。
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8楼2014-08-28 15:55:41
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考拉003

新虫 (小有名气)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流经验！ 2014-09-20 21:09:08
可以的吧，我们用T4连接酶，有时候还用solution I
赞一下 回复此楼
不是微生物专业的却进入微生物行业
9楼2014-08-28 17:25:23
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a50044758

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-08-28 21:22:18
完全没有任何影响！他们的连接体系里面的连接酶都是用的T4连接酶，连接酶对不同buffer的适应性是很强的，你放心的用吧！
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10楼2014-08-28 20:49:02
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