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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 综合其他 » 同一个基因片段连到两个不同载体，序列就不一样了？
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why025

铁虫 (小有名气)

[求助] 同一个基因片段连到两个不同载体，序列就不一样了？ 已有3人参与

我从CDNA里P了个基因片段，分别连到两个载体里，测序回来结果一个正确，另一个片段中间插入了一个碱基，我又重测了一次还是这个结果。这什么情况。。有人遇到过么？
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1楼 2014-08-25 10:29:55
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尘香驻风

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
why025: 金币+4, ★有帮助 2014-08-26 12:02:22
不知道你的基因P出来后有没有纯化或者跑胶鉴定？还有两个载体分别送了多少个去测序呢？一般如果是同一个片段，测序结果应该是一样的。我觉得你这个是P出来两个片段，但因为两个片段只差了一个碱基，没办法分离，导致你两个载体刚好分别连了两个片段。你后面重测是直接送连接载体后的产物还是重新连接后再送的呀？
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2楼2014-08-25 15:44:58
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why025

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 尘香驻风 at 2014-08-25 15:44:58
不知道你的基因P出来后有没有纯化或者跑胶鉴定？还有两个载体分别送了多少个去测序呢？一般如果是同一个片段，测序结果应该是一样的。我觉得你这个是P出来两个片段，但因为两个片段只差了一个碱基，没办法分离，导致 ...

我倒是没重新连接，直接重新送的载体。我也想是不是你这种解释，不过这样也太巧了一点。。。
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3楼2014-08-25 16:10:29
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尘香驻风

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by why025 at 2014-08-25 16:10:29
我倒是没重新连接，直接重新送的载体。我也想是不是你这种解释，不过这样也太巧了一点。。。...

=。=有时候实验就是巧到不行。。。要不你就重新连一个再送测序。。。
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4楼2014-08-25 16:21:37
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zhaozhibozhi

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
why025: 金币+1, ★有帮助 2014-08-26 12:02:42
很正常，PCR就这样，多个碱基、少个碱基、突变个碱基都是常有的事
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做一个阳光、开朗的小和尚
5楼2014-08-25 16:41:13
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why025

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 尘香驻风 at 2014-08-25 16:21:37
=。=有时候实验就是巧到不行。。。要不你就重新连一个再送测序。。。...

我一共做了4个基因，每个基因都连入两个载体，现在4对里面有两对出现了这个问题，也就是一个载体测序正确，另一个有移码。这概率正常吗？
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6楼2014-08-25 19:52:59
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why025

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by zhaozhibozhi at 2014-08-25 16:41:13
很正常，PCR就这样，多个碱基、少个碱基、突变个碱基都是常有的事

我一共做了4个基因，每个基因都连入两个载体，现在4对里面有两对出现了这个问题，也就是一个载体测序正确，另一个有移码。这概率正常吗？
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7楼2014-08-25 20:11:38
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zhaozhibozhi

金虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by why025 at 2014-08-25 20:11:38
我一共做了4个基因，每个基因都连入两个载体，现在4对里面有两对出现了这个问题，也就是一个载体测序正确，另一个有移码。这概率正常吗？...

看你用的是什么酶了
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做一个阳光、开朗的小和尚
8楼2014-08-26 07:57:06
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尘香驻风

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by why025 at 2014-08-25 19:52:59
我一共做了4个基因，每个基因都连入两个载体，现在4对里面有两对出现了这个问题，也就是一个载体测序正确，另一个有移码。这概率正常吗？...

也是可能的，毕竟不知道你PCR产物里谁多谁少，而且跟你用的酶也有关系。
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9楼2014-08-26 09:20:31
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hikers86

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
正常现象，PCR多个碱基少个碱基都正常
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10楼2014-08-26 09:50:39
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