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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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hakkie

新虫 (初入文坛)

[求助] 细胞冻存 已有3人参与

结肠癌lovo细胞,25cm培养瓶,冻存时致密度为50%,冻存1ml*2管,一个月后复苏细胞生长状态极差。这个和冻存时密度小有多大关系?冻存前细胞生长状态好;另外由于同时还冻存了其他几管密度90%的同种细胞,复苏后细胞状态挺好,所以冻存液和冻存程序是没问题的。这次复苏因为培养基换了牌子,所以不知道是培养基的问题,还是因为细胞冻存时密度低,冻存效果不好的原因。
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风信子寻梦

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
hakkie: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-12-07 22:08:47
50%冻两管,密度明显太低,冻存液里的DMSO对细胞有毒性,再加上冻存时本来就会死亡一些细胞,冻存时密度太低,就会造成很难复苏!最好是细胞培养到融合率达到70%以上时才去传代或冻存。我们实验室的经验是,当细胞融合率为90%左右时冻存细胞,一个培养盘(直径10cm)冻存三管!你可以参考一下!

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4楼2014-08-21 14:08:15
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逍潇

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
冻存密度小了,我们一般两个25cm2培养瓶长满存一管。
2楼2014-08-21 10:20:08
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gikyo

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
冻存细胞密度一般(5-10)*10^6个/ml
你的冻存密度太小。培养基换牌子影响不会太大,只要你是用的同类培养基。
3楼2014-08-21 13:07:55
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hakkie

新虫 (初入文坛)

送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by 风信子寻梦 at 2014-08-21 14:08:15
50%冻两管,密度明显太低,冻存液里的DMSO对细胞有毒性,再加上冻存时本来就会死亡一些细胞,冻存时密度太低,就会造成很难复苏!最好是细胞培养到融合率达到70%以上时才去传代或冻存。我们实验室的经验是,当细胞融 ...

多谢回复~
5楼2014-08-21 17:43:05
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