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lilongping

新虫 (正式写手)

[求助] PCR扩增严重弥散,但是以前用同样方法,条件和试剂都是结果非常好的 已有5人参与

大家看看我这个PCR图片是什么原因呢?
PCR条件是:94° 60s, 52°60s,72° 5min, 扩增循环35圈,用的是3步PCR实验的。这个程序我一直在用,模板是细菌基因组。前一段时间用同样的PCR方法,试剂,模板等等都是一样的,扩增出来了目的条带,实验结果非常好。最近,我想重复这个实验,再做一些回收回来测序用,但是,怎么重复,都是这种严重弥散啊,大家看看这种情况应该怎么办呢?

前后用的PCR条件和试剂都是完全一样的。

两边最边上的3个泳道都是不同大小的DNA分子量标准Marker,他们是清醒可见的。

PCR扩增严重弥散,但是以前用同样方法,条件和试剂都是结果非常好的
2014-08-14  5个12_5扩增失败.jpg
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hufangzhou

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我以前也出现过这种情况,把模板稀释十倍后就好了,你可以试试看!
7楼2014-08-19 08:21:39
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owl2010

金虫 (正式写手)

是不是模板有降解,电泳看一下模板有没有问题。
男人的组成要素:金钱、面子、性、怕死、自恋、吹牛逼。
2楼2014-08-18 12:13:27
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vapordw

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
lilongping(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-08-18 15:50:31
既然条件跟试剂都一样,差不多也就是模板有问题了吧
3楼2014-08-18 14:38:55
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trizol11

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
lilongping(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-08-18 15:50:39
酶量太大,延伸时间短,你修改一下在跑一次试试,
拖带很严重。
任重道远……
4楼2014-08-18 15:21:05
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