| 查看: 1472 | 回复: 6 | |||
lilongping新虫 (正式写手)
|
[求助]
长片段克隆用invitrogen公司试剂盒问题求助 已有3人参与
|
|
最近用PCR扩增得到6.5k左右条带，想做做长片段PCR克隆，用Invitrogen公司的TOPO® XL PCR Cloning试剂盒做了一次克隆：按照这个试剂盒操作说明，片段4ul 连接1ul 载体，25℃，30min后，转化到TOP 10 感受态，在卡拉霉素抗性平板上过夜培养后，生长了大概有200左右的克隆，我挑取24个之后用M13F-M13R引物做菌落PCR,但是，检测的结果非常奇怪：有很多条带，大家看看这个是什么原因，哪里出问题了啊？ 我连接的PCR片段是条带单一的，浓度为26ng/ul。 图片最中间的是全式金15k的DNA分子量Marker  2014-08-17 长片段克隆检测G,H;.jpg |
回复此楼» 猜你喜欢
湖北师范大学招调剂啦
已经有9人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有105人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
化工申博
已经有3人回复
-
申博自荐
已经有2人回复
-
广西民族大学化学化工学院化学工程与技术学硕，材料化工专硕调剂名额充足！
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- smd1168毕赤酵母转化问题
已经有20人回复
- TA克隆，假阳性？假阴性？
已经有16人回复
- 关于PCR引物中加入酶切位点的设计方法和酶切问题！ 新手，求帮忙！！
已经有4人回复
- Nhe I和Hind III 双酶切pcDNA3.1(+)和目的片段2300bp，却连不上，求各位帮忙啊
已经有17人回复
- 反转录前 DNA 酶消化
已经有10人回复
- 大片段连接问题
已经有20人回复
- 求助具体的（具体的）无连接酶亚克隆法全步骤，从PCR到克隆
已经有13人回复
- 酵母阳性转化子筛选
已经有5人回复
- [求助]高保真酶扩不出来
已经有15人回复
- 【求助/交流】请问大家：将外源DNA与载体连接的体系怎么确定啊？
已经有7人回复
- 【求助/交流】5'RACE试剂盒的选择？
已经有9人回复
- 【求助/交流】克隆Amp/Kan选择以及蓝白筛选
已经有10人回复
- 【求助/交流】从RNA到cDNA合成再到克隆PCR的实验技巧和操作细节问题若干，寻求解答
已经有12人回复
- 【推荐】世界著名的生物技术公司
已经有41人回复
- 【求助/交流】哪种T载体可以克隆6kb的片段。
已经有9人回复
- 【求助/交流】PCR产物与T载体的连接的实验原理？
已经有5人回复
鬼羽帝魂
木虫 (著名写手)
- 应助: 183 (高中生)
- 金币: 3100.2
- 散金: 19
- 红花: 12
- 帖子: 1427
- 在线: 186.8小时
- 虫号: 2538789
- 注册: 2013-07-09
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
2楼2014-08-18 15:26:09
trizol11
木虫 (正式写手)
- 应助: 47 (小学生)
- 金币: 2714.2
- 散金: 199
- 红花: 3
- 帖子: 572
- 在线: 172.8小时
- 虫号: 1711824
- 注册: 2012-03-23
- 性别: GG
- 专业: 兽医药理学与毒理学
3楼2014-08-18 15:37:29
4楼2014-08-18 17:11:19
lilongping
新虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 5950.1
- 散金: 20
- 帖子: 615
- 在线: 64.7小时
- 虫号: 884477
- 注册: 2009-10-26
- 性别: GG
- 专业: 畜牧学
5楼2014-08-18 22:37:54
lilongping
新虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 5950.1
- 散金: 20
- 帖子: 615
- 在线: 64.7小时
- 虫号: 884477
- 注册: 2009-10-26
- 性别: GG
- 专业: 畜牧学
6楼2014-08-18 22:39:36
鬼羽帝魂
木虫 (著名写手)
- 应助: 183 (高中生)
- 金币: 3100.2
- 散金: 19
- 红花: 12
- 帖子: 1427
- 在线: 186.8小时
- 虫号: 2538789
- 注册: 2013-07-09
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
7楼2014-08-19 14:37:38
