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落木潇潇sky

铁虫 (初入文坛)

[求助] 连接转化 已有4人参与

lz本科实验菜鸟一枚,现在在做茶花的its。现在遇到问题,所有的程序都按照说明书操作的,连接试剂是TAKARA的,生工的提取试剂盒,胶回收试剂盒,菌用的是DH5α。可是最后AMP上就是不长菌,感受态涂LB是长菌的。怀疑连接转化有问题,可是无从下手,求指教!
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一条实验狗
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落木潇潇sky

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by ncuduhan at 2014-08-17 11:14:01
说明连接的问题咯,你是连接到什么质粒上的?T-easy吗?还是其他的质粒?

takara的18T
一条实验狗
6楼2014-08-28 09:56:21
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ncuduhan

银虫 (正式写手)

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落木潇潇sky: 金币+1, 有帮助 2014-08-28 09:58:06
说明连接的问题咯,你是连接到什么质粒上的?T-easy吗?还是其他的质粒?
2楼2014-08-17 11:14:01
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yang_g_g

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
落木潇潇sky(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-08-17 20:31:36
连接时测一下产物含量,连接试剂盒换个新(反复冻融影响大),另外注意amp用量,可用实验室阳性菌作对照,看看长不长。
3楼2014-08-17 12:39:42
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wangranjun

荣誉版主 (知名作家)

广庭之惘然

优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
怀疑是连接问题的话可以做一个对照,可以将没有经过酶切的载体做转化涂板看看是否能长出单克隆,若能长出来可能是连接出问题,可以适当延长连接时间或更换酶切位点,若不能长出单克隆说明载体有问题喽!
他日扬翼九万里,历大千世界,定我红尘心!
4楼2014-08-17 15:12:12
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