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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 请教高人：用于蛋白样品分析的原子力探针有什么要求？
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酷恋花

木虫 (正式写手)

[求助] 请教高人：用于蛋白样品分析的原子力探针有什么要求？ 已有1人参与

是不是只要力常数低至零点几就可以了呢？还有别的什么需要注意的吗？一直想用原子力对我的蛋白样品成像，可是一直没做出来。想试试液态成像····感激不尽。
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莫懈怠，时间不多了！
1楼 2014-08-14 09:26:09
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酷恋花

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by dustpuppet at 2014-08-15 11:10:26
蛋白本身尺寸很小， 就算是streptavidin这种大蛋白，如果不凝聚，也就1-2纳米。 如果你想用AFM看单个蛋白的结构，比较难。 针尖直径都有6nm了。 除非你看蛋白聚合物还可以。 水溶液中的蛋白结构可以做，但是最好先想 ...

首先感谢您的应助。我看的是微丝，单根的直径有7纳米，束状的有几十上百纳米呢～我看有的文献里就直接让微丝吸附在云母上，自然干燥，然后就直接用接触模式扫了了～给的图片也挺清晰的～为啥我扫不出来呢……郁闷呐……

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莫懈怠，时间不多了！
3楼2014-08-15 14:40:15
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dustpuppet

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
酷恋花: 金币+20, ★★★★★最佳答案, 感谢热心回复～忘了给评分了～ 2014-08-15 22:00:55
蛋白本身尺寸很小， 就算是streptavidin这种大蛋白，如果不凝聚，也就1-2纳米。 如果你想用AFM看单个蛋白的结构，比较难。 针尖直径都有6nm了。 除非你看蛋白聚合物还可以。 水溶液中的蛋白结构可以做，但是最好先想办法把蛋白固定基地上。 常用的方法就是云母+APTES+戊二醛。 通过戊二醛来交联蛋白固定。这个是手艺活
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我只谈技术
2楼2014-08-15 11:10:26
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dustpuppet

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 酷恋花 at 2014-08-15 14:40:15
首先感谢您的应助。我看的是微丝，单根的直径有7纳米，束状的有几十上百纳米呢～我看有的文献里就直接让微丝吸附在云母上，自然干燥，然后就直接用接触模式扫了了～给的图片也挺清晰的～为啥我扫不出来呢……郁闷呐 ...

如果你的微丝是带负电的，那就不用指望他能自然的吸附到云母，直接排斥就走了。 文献很多细节是不透露的，你按照那些文祥的方法，十有八九都做不出来。 慢慢你就懂了。 如果你的微丝的类型跟文献里面一样，那么根据我的经验，你可以考虑一下溶液的pH值调节，还有就是干燥的湿度。 另外，如果你是自然干燥，那么很可能他们就会团聚在最后干燥的那个中心小区域，其他地方是完全什么都没有的。我从来就不用自然干燥的方法，因为表面会有大量溶液物质残留，扫出来都不知道是什么东西，万一被撤稿，这辈子都不用混了
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我只谈技术
4楼2014-08-16 14:57:22
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酷恋花

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by dustpuppet at 2014-08-16 14:57:22
如果你的微丝是带负电的，那就不用指望他能自然的吸附到云母，直接排斥就走了。 文献很多细节是不透露的，你按照那些文祥的方法，十有八九都做不出来。 慢慢你就懂了。 如果你的微丝的类型跟文献里面一样，那么根据 ...

不用自然干燥？那看来就只有用氩气或者氮气啥的吹干了呗？可是这样就不会有溶液物质残留了吗？我昨天的样品的确看上去很脏，不知道是盐结晶还是别的什么杂质～想不到我的二次水也不过如此～

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莫懈怠，时间不多了！
5楼2014-08-16 17:39:43
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