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蓝默儿

金虫 (小有名气)

[求助] 夹心ELISA方法的建立及酶标单抗 已有6人参与

本人一直在建定量夹心ELISA方法:双抗体夹心检抗原,但是阴性、空白值很高。阳性OD=1.3,阴性=0.46,先头觉得是封闭液问题,尝试过几种封闭液:脱脂乳,BSA,明胶,马血清。但都没有明显改变。再想是不是本人标记单抗出现问题了,
    酶标单抗是用改良的过碘酸钠法将HRP标记到单抗上,我再想是不是酶标单抗溶液中有未结合的游离HRP,在建夹心ELISA方法的过程中,游离的HRP结合到板子上,引起非特异性结合。请做过的前辈给予指点,谢谢
    怎样去除游离的HRP,我的酶标抗体有的是用50%的甘油保存的,有的是50微升分装保存的。
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微笑,自信,加油
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ahchljctw

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 蓝默儿 at 2014-11-19 09:28:38
你做的比我快,我刚出来标准曲线。不稳定的话,封闭液中加1%蔗糖你再试试,起到保护包被蛋白的作用。...

谢谢啊,有问题再请教你
Stayhungry,stayfoolish
9楼2014-11-19 18:29:44
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可儿不苦

金虫 (著名写手)

楼主,你的标记步骤可否告知? 我接下来的实验可能要用HRP标记单抗
幸福那一个美梦,是二人同行才有。
2楼2014-09-09 15:33:36
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ahchljctw

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

楼主,我也做双抗体夹心检测抗原,阳性OD差异性太大了,不稳定,同一个抗原,多次重复的检测结果大于10%,还有标准品的OD差异也大,但是R方很好0.99 .求教什么原因
Stayhungry,stayfoolish
3楼2014-10-17 00:20:02
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蓝默儿

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by ahchljctw at 2014-10-17 00:20:02
楼主,我也做双抗体夹心检测抗原,阳性OD差异性太大了,不稳定,同一个抗原,多次重复的检测结果大于10%,还有标准品的OD差异也大,但是R方很好0.99 .求教什么原因

你做的比我快,我刚出来标准曲线。不稳定的话,封闭液中加1%蔗糖你再试试,起到保护包被蛋白的作用。
微笑,自信,加油
4楼2014-11-19 09:28:38
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