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Hi-tail PCR 第一轮有条带，第二轮有至少一条亮度很高的条带，但是第三轮无条带。 已有1人参与
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我一直在扩增转座子插入突变体侧翼未知序列，参考的方法是刘老师2007年发表的 High-efficiency thermal asymmetric interlaced PCR for amplification of unknown flanking sequences 文章中的Hi-tail PCR方法，随机兼并引物用的是文章中报道的。结果是第一轮有条带，第二轮90%以上会出现一条最亮的带，浓度很高，大小在1kb-2kb间（不知道是不是特异性的目标带），但是第三轮出现涂带，或是能看见几条亮度很弱的带，重复多次，结果相同，见附图，1 表示第一轮PCR，2 第二轮pcr，3 第三轮 pcr。也试过了换掉特异性引物，随机引物组合的方法，结果也类似。着急啊！困惑啊！不知道哪位做过Hi-tail PCR的高手指点下，为什么一直会有这样的结果？ pcr 图.png |
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