24小时热门版块排行榜

>论坛更新日志 (3996)
>导师招生 (333)
>休闲灌水 (168)
>招聘信息布告栏 (139)
>论文道贺祈福 (113)
>虫友互识 (113)
>硕博家园 (97)
>文献求助 (93)
>找工作 (45)
>考研 (45)
>考博 (41)
>基金申请 (40)
>博后之家 (30)
>生物科学 (29)
>教师之家 (21)
>医学 (18)

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

sophia-yxh

铜虫 (正式写手)

应助: 3 (幼儿园)
金币: 329.2
散金: 488
红花: 10
帖子: 528
在线: 245.2小时
虫号: 1358919
注册: 2011-08-02
性别: MM
专业: 药理学其他科学问题

[求助] WB和elisa结果不一致已有3人参与

目前本人一直在做IFN的融合蛋白，是通过酵母分泌表达所得；以前是用大肠杆菌包涵体表达的，通过复性获得样品，该样品通过ELISA\WB检测，以IFN抗体检测的，均为阳性结果，且做抗病毒实验，其抗病毒活性也和市场销售的IFN在同一个数量级，但是不能达到我们的目标要求，所以选择真核酵母分泌表达，想获得IFN和另一个蛋白A的双重作用；

酵母表达的IFN融合蛋白通过ELISA检测是为阳性的，也是用IFN抗体的，我们是自己包板的；但是WB检测却总是阴性的，我们同时以以前原核表达的作为对照，对照每次WB的结果都很稳定是阳性的，但是酵母分泌表达的却很难做出阳性的，虽然也做出来1-2次，我现在由以下几点担心：
1.IFN从融合蛋白上脱落了；
2. IFN上有一个糖基化位点，是不是在真核中糖基化了，恰好遮住了抗体识别位点；
3.我是通过DAB显色的，是不是显色方式不正确；

请大家帮我讨论讨论，谢谢

回复此楼