| 查看: 1597 | 回复: 9 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
A-T克隆重组质粒筛选 菌落PCR 已有2人参与
|
||
| 我使用pMD19-T对1600bp基因片段进行A-T克隆，在含有Amp的LB平板上长有少量的菌落，分别挑取半个菌落进行菌落PCR，但是电泳确认是发现所有菌落的条带均一致但都小于目的片段（小于1000bp），PCR所用试剂均没有问题以前使用过，请高手指教是哪里出现了问题，万分感谢！！！！！ |
回复此楼» 猜你喜欢
湖北师范大学招调剂啦
已经有9人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有178人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
化工申博
已经有3人回复
-
申博自荐
已经有3人回复
-
广西民族大学化学化工学院化学工程与技术学硕，材料化工专硕调剂名额充足！
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 质粒PCR产物片段大小问题
已经有15人回复
- 质粒构建，挑单菌落验证总是假阳性，求分析原因？！
已经有29人回复
- PCR产物做克隆，菌液涂平板后长得很慢是什么原因？
已经有17人回复
- 如何检测目的片段转没转到质粒上？
已经有16人回复
- 菌落PCR有目的条带，重组质粒提取PCR却没条带，请问是什么原因？
已经有13人回复
- 用的pCDNA-5重组质粒，通过测序检验质粒+目的基因是否构建成功
已经有5人回复
- 大神救命！！！菌液PCR 出来酶切质粒没有目的条带
已经有5人回复
- 挑取单克隆后的PCR验证
已经有3人回复
- 质粒测序 pcr产物ta克隆后送去测序 为什么要测双向
已经有6人回复
- 菌落PCR使用的通用引物序列是什么？
已经有9人回复
- 诚心求教各位前辈：筛选扩增体系时的PCR图片，这是怎么回事啊？
已经有5人回复
- 蓝白斑筛选白色菌落PCR无条带
已经有12人回复
- 我用sal Ⅰ和xho Ⅰ双酶切链接目的基因，菌落pcr能p出目的条带，但酶切切不开。
已经有18人回复
- 目的基因连接到克隆载体后提取质粒测序，序列有问题
已经有11人回复
- 连接转化后挑菌落，测序是混合克隆，是怎么回事？
已经有9人回复
- 菌液pcr出来后，质粒提不出，测序老失败？
已经有6人回复
- 菌液PCR是阳性，却提不出来阳性质粒！求助
已经有31人回复
- pcr产物测序和克隆之后重组质粒测序结果一样吗？
已经有12人回复
- PCR鉴定与酶切鉴定
已经有11人回复
- 求PCR解！谢谢！
已经有13人回复
- 【求助/交流】连接产物转化后菌落PCR正确，提取的质粒却比空质粒还小？
已经有4人回复
- 【求助/交流】重组质粒转化
已经有22人回复
- 【求助/交流】怎样区分空载和重组质粒？
已经有9人回复
7楼2014-08-08 12:24:07
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-08-06 23:03:59
sunyu65045: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-08-07 15:13:13
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-08-06 23:03:59
sunyu65045: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-08-07 15:13:13
|
-你确定在基因片段两端加上3‘A了么。如果没有，可以用Taq酶加3’A再连接。 -pMD19-T应该是可以做蓝白斑筛选的吧，建议用LB AMP板加上IPTG+X-Gal做蓝白斑筛选，挑白斑做PCR。白斑的插入率应该有90%以上。 如果你现在已有LB AMP板，只需要加 100μl的100mM IPTG和 20μl的50mg/ml X-Gal在板上，涂抹均匀后37°C放置半个小时吸收IPTG和X-Gal，然后就可以用转化菌液涂板了。 |
2楼2014-08-06 18:23:16
馨-馨
银虫 (小有名气)
- 应助: 10 (幼儿园)
- 金币: 135.4
- 散金: 34
- 帖子: 115
- 在线: 55.3小时
- 虫号: 1390789
- 注册: 2011-09-05
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
3楼2014-08-06 21:57:58
4楼2014-08-07 15:15:25
20