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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 问题：蛋白电泳PAGE胶不凝固？+孔道形成比较短？
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charles08

铁杆木虫 (著名写手)

[求助] 问题：蛋白电泳PAGE胶不凝固？+孔道形成比较短？ 已有3人参与

问题一：一面是自己配置的分离胶加上160微升APS和12微升TEMED后倒胶，2小时后仍然不凝固，工作外界温度为33度
         另外做对照用从碧云天买的29:1丙烯酰胺和PH8.8溶液配置的分离胶加入相同的APS和TEMED，2小时候凝固，但是胶面有所下移
      不知原因是什么？自己配置是按分子克隆上的配方来的

问题二：用配好的分离胶上加入PH6.8做浓缩胶，倒好后凝固发现孔径下移，形成较短（放入冰箱也出现浓缩胶浓缩形成孔道短了半截，原来冬天不存在这个问题）不知如何解决这个问题，请高手赐教，谢谢！
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1楼 2014-08-04 18:31:45
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charles08

铁杆木虫 (著名写手)
问题解决了，原因是：药品失效

崩溃！

就好比查电脑问题最后发现是接触不良的原因。
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8楼2014-08-08 10:47:40
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逍潇

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
13楼: Originally posted by charles08 at 2014-08-08 15:23:13
AP容易吸湿失效吗？

我是AP和TEMED两个都换了

我们这边TEMED用了很久了，好几年了，都有带黄色了。所以我怀疑TEMED问题大些...

AP放冰箱里还好，不是很容易吸湿。我们实验室的TEMED也用了好几年，不过没有带黄色。保险起见你最好都换新的，用的时候分装出来，不要每次用都在原瓶里面取。
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14楼2014-08-08 17:13:32
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普通回帖

ssssllllnnnn

至尊木虫 (知名作家)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
charles08(youlinglyw代发): 金币+3, 赠人玫瑰手有余香，生物科学有你更精彩！ 2014-08-06 15:17:18
1、适当增加TEMED和APS用量；
2、APS要新鲜配制。
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2楼2014-08-04 21:08:28
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charles08

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ssssllllnnnn at 2014-08-04 21:08:28
1、适当增加TEMED和APS用量；
2、APS要新鲜配制。

量有 蛮多了哦，坛子里加这么多少吧

APS是新配的
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3楼2014-08-05 08:50:28
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kimi2000

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
charles08(youlinglyw代发): 金币+3, 赠人玫瑰手有余香，生物科学有你更精彩！ 2014-08-06 15:17:27
本帖内容被屏蔽
4楼2014-08-06 09:54:52
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ShawRr

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
环境温度30度的时候一般10min之内是可以凝的，我之前也出现过半个小时不凝的时候，后来换了同学的AP用，5min就凝了，建议你换AP试试（你之前的AP可能已经失效了，新配也没有多大作用）
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5楼2014-08-06 16:16:34
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charles08

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by kimi2000 at 2014-08-06 09:54:52
TEMED多放点，胶面下移是不是没夹紧漏掉了。 一般我从洗板子制胶到拔梳子也就一小时多一点，两小时还不凝固是不是制胶的各成分中有问题了。

按您的经验，制胶成分哪个最容易出问题？
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6楼2014-08-08 09:41:54
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charles08

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by ShawRr at 2014-08-06 16:16:34
环境温度30度的时候一般10min之内是可以凝的，我之前也出现过半个小时不凝的时候，后来换了同学的AP用，5min就凝了，建议你换AP试试（你之前的AP可能已经失效了，新配也没有多大作用）

不知怎么验证APS怎么才是没有失效的？

我每次都是从那个瓶子里取的样品，药品颗粒很白似乎还挺好的
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7楼2014-08-08 09:43:33
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charles08

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by ShawRr at 2014-08-06 16:16:34
环境温度30度的时候一般10min之内是可以凝的，我之前也出现过半个小时不凝的时候，后来换了同学的AP用，5min就凝了，建议你换AP试试（你之前的AP可能已经失效了，新配也没有多大作用）

谢谢您的提醒，查明是药品问题
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9楼2014-08-08 10:48:15
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ShawRr

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by charles08 at 2014-08-08 10:48:15
谢谢您的提醒，查明是药品问题...

我以前也被这个问题困扰好久
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10楼2014-08-08 12:37:48
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