24小时热门版块排行榜    

查看: 3305  |  回复: 10
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

yyc12596

新虫 (著名写手)

[交流] PMA分化后的THP1细胞转染 已有2人参与

PMA 100ng/ml分化72小时之后的THP1的生物学特性仍然近似单核细胞(形态学上已经完全是巨噬细胞了)。

使用Lonza的human monocyte nucleofector kit转染(VPA-1007).

电转24小时之后做刺激,收养。

WB验证目标蛋白已经被敲除。但是糟糕的是目标因子的分泌没有降低。

首先要考虑转染的过程问题。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yyc12596

新虫 (著名写手)

之前的方法是先转染THP1单核细胞,然后用PMA分化转染后的细胞成巨噬。

但是这种分化24小时内就会导致绝大多数的细胞死亡。谈不上继续分化。
4楼2014-08-01 23:31:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

yyc12596

新虫 (著名写手)

★ ★
youlinglyw: 金币+2, 赠人玫瑰手有余香,生物科学有你更精彩! 2014-08-02 10:51:52
用单核试剂盒来电转THP1的依据来自以下文章:Efficient non-viral transfection of THP-1 cells

2009年的一篇文章。
2楼2014-08-01 23:19:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yyc12596

新虫 (著名写手)

Lonza的单核试剂盒,人原代单核细胞的转染效率在55%左右,细胞存活率在70%。

THP1-derived macrophage(TDM)感觉电转之后细胞的存活率只有50%左右。第二天很多细胞都漂浮或者已经裂解了。
3楼2014-08-01 23:24:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yyc12596

新虫 (著名写手)

转染前THP1分化的方案:
RPMI 1640(10%FBS, 1%双抗,1%L-Glu),50uM 2-ME(Sigma),100ng/ml PMA(Sigma)分化48小时。
5楼2014-08-01 23:34:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料调剂 +3 匹克i 2026-03-23 3/150 2026-03-23 23:18 by peike
[考研] 一志愿国科过程所081700,274求调剂 +3 三水研0水立方 2026-03-23 3/150 2026-03-23 23:11 by MajorWen
[考研] 384求调剂 +3 子系博 2026-03-22 6/300 2026-03-23 21:45 by 子系博
[基金申请] 请教下大家 2026年国家基金申请是双盲审吗? +3 lishucheng1 2026-03-22 4/200 2026-03-23 20:48 by god_tian
[考研] 上海电力大学材料防护与新材料重点实验室招收调剂研究生(材料、化学、电化学,环境) +3 我爱学电池 2026-03-23 3/150 2026-03-23 17:16 by AZMK
[考研] 一志愿东华大学化学070300,求调剂 +7 2117205181 2026-03-21 8/400 2026-03-22 22:55 by chixmc
[考研] 280分求调剂 一志愿085802 +4 PUMPT 2026-03-22 7/350 2026-03-22 22:13 by 星空星月
[考研] 一志愿西安交通大学材料工程专业 282分求调剂 +11 枫桥ZL 2026-03-18 13/650 2026-03-22 20:26 by edmund7
[考研] 311求调剂 +6 冬十三 2026-03-18 6/300 2026-03-22 20:18 by edmund7
[考研] 一志愿中南化学(0703)总分337求调剂 +9 niko- 2026-03-19 10/500 2026-03-22 16:08 by ColorlessPI
[考研] 268求调剂 +9 简单点0 2026-03-17 9/450 2026-03-21 15:37 by lature00
[考研] 301求调剂 +10 yy要上岸呀 2026-03-17 10/500 2026-03-21 03:14 by JourneyLucky
[考研] 初始318分求调剂(有工作经验) +3 1911236844 2026-03-17 3/150 2026-03-21 02:33 by JourneyLucky
[考研] 南京大学化学376求调剂 +3 hisfailed 2026-03-19 6/300 2026-03-20 23:43 by hisfailed
[考研] 一志愿南昌大学,327分,材料与化工085600 +9 Ncdx123456 2026-03-19 9/450 2026-03-20 23:41 by lovewei0727
[考研] 一志愿中海洋材料工程专硕330分求调剂 +8 小材化本科 2026-03-18 8/400 2026-03-20 23:16 by JourneyLucky
[考研] 一志愿 西北大学 ,070300化学学硕,总分287,双非一本,求调剂。 +4 晨昏线与星海 2026-03-19 4/200 2026-03-20 22:15 by JourneyLucky
[考研] 一志愿西南交通 专硕 材料355 本科双非 求调剂 +5 西南交通专材355 2026-03-19 5/250 2026-03-20 21:10 by JourneyLucky
[考研] 353求调剂 +3 拉钩不许变 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:56 by JourneyLucky
[考研] 材料,纺织,生物(0856、0710),化学招生啦 +3 Eember. 2026-03-17 9/450 2026-03-18 10:28 by Eember.
信息提示
请填处理意见