24小时热门版块排行榜    

查看: 3314  |  回复: 10
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

yyc12596

新虫 (著名写手)

[交流] PMA分化后的THP1细胞转染 已有2人参与

PMA 100ng/ml分化72小时之后的THP1的生物学特性仍然近似单核细胞(形态学上已经完全是巨噬细胞了)。

使用Lonza的human monocyte nucleofector kit转染(VPA-1007).

电转24小时之后做刺激,收养。

WB验证目标蛋白已经被敲除。但是糟糕的是目标因子的分泌没有降低。

首先要考虑转染的过程问题。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yyc12596

新虫 (著名写手)

之前的方法是先转染THP1单核细胞,然后用PMA分化转染后的细胞成巨噬。

但是这种分化24小时内就会导致绝大多数的细胞死亡。谈不上继续分化。
4楼2014-08-01 23:31:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

yyc12596

新虫 (著名写手)

★ ★
youlinglyw: 金币+2, 赠人玫瑰手有余香,生物科学有你更精彩! 2014-08-02 10:51:52
用单核试剂盒来电转THP1的依据来自以下文章:Efficient non-viral transfection of THP-1 cells

2009年的一篇文章。
2楼2014-08-01 23:19:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yyc12596

新虫 (著名写手)

Lonza的单核试剂盒,人原代单核细胞的转染效率在55%左右,细胞存活率在70%。

THP1-derived macrophage(TDM)感觉电转之后细胞的存活率只有50%左右。第二天很多细胞都漂浮或者已经裂解了。
3楼2014-08-01 23:24:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yyc12596

新虫 (著名写手)

转染前THP1分化的方案:
RPMI 1640(10%FBS, 1%双抗,1%L-Glu),50uM 2-ME(Sigma),100ng/ml PMA(Sigma)分化48小时。
5楼2014-08-01 23:34:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 279分求调剂 一志愿211 +18 chaojifeixia 2026-03-19 20/1000 2026-03-24 10:34 by dolphin_ycj
[考博] 26申博自荐 +3 whh869393 2026-03-24 3/150 2026-03-24 09:55 by 21018060
[考研] 一志愿山东大学药学学硕求调剂 +3 开开心心没烦恼 2026-03-23 4/200 2026-03-24 00:06 by 开开心心没烦恼
[考研] 085600材料与化工调剂 +7 A-哆啦Z梦 2026-03-23 12/600 2026-03-23 23:16 by 星空星月
[考研] 269求调剂 +4 我想读研11 2026-03-23 4/200 2026-03-23 21:25 by pswait
[考研] 303求调剂 +4 元夕元 2026-03-20 4/200 2026-03-23 19:00 by macy2011
[考研] 328求调剂 +4 LHHL66 2026-03-23 4/200 2026-03-23 14:55 by lbsjt
[考研] 北科281学硕材料求调剂 +8 tcxiaoxx 2026-03-20 9/450 2026-03-23 12:16 by tcxiaoxx
[考研] 317求调剂 +12 申子申申 2026-03-19 18/900 2026-03-22 22:23 by luoyongfeng
[考研] 材料与化工085600,总分304,本科有两篇sci参与,求调剂 +4 幸运的酱酱 2026-03-22 5/250 2026-03-22 20:15 by edmund7
[考研] 求调剂 +3 13341 2026-03-20 3/150 2026-03-21 18:28 by 学员8dgXkO
[考研] 296求调剂 +4 www_q 2026-03-20 4/200 2026-03-21 17:26 by 学员8dgXkO
[考研] 266求调剂 +3 哇呼哼呼哼 2026-03-20 3/150 2026-03-21 16:46 by barlinike
[基金申请] 学校已经提交到NSFC,还能修改吗? 40+4 babangida 2026-03-19 9/450 2026-03-21 16:12 by babangida
[考研] 324分 085600材料化工求调剂 +4 llllkkkhh 2026-03-18 4/200 2026-03-21 01:24 by JourneyLucky
[考研] 295求调剂 +4 一志愿京区211 2026-03-18 6/300 2026-03-20 23:41 by JourneyLucky
[考研] 0856调剂,是学校就去 +8 sllhht 2026-03-19 9/450 2026-03-20 14:25 by 无懈可击111
[论文投稿] 申请回稿延期一个月,编辑同意了。但系统上的时间没变,给编辑又写邮件了,没回复 10+3 wangf9518 2026-03-17 4/200 2026-03-19 23:55 by babero
[考研] 材料考研调剂 +3 xwt。 2026-03-19 3/150 2026-03-19 11:22 by w沐阳w
[考研] 材料,纺织,生物(0856、0710),化学招生啦 +3 Eember. 2026-03-17 9/450 2026-03-18 10:28 by Eember.
信息提示
请填处理意见