24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 3383  |  回复: 10
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

yyc12596

新虫 (著名写手)

[交流] PMA分化后的THP1细胞转染 已有2人参与

PMA 100ng/ml分化72小时之后的THP1的生物学特性仍然近似单核细胞(形态学上已经完全是巨噬细胞了)。

使用Lonza的human monocyte nucleofector kit转染(VPA-1007).

电转24小时之后做刺激,收养。

WB验证目标蛋白已经被敲除。但是糟糕的是目标因子的分泌没有降低。

首先要考虑转染的过程问题。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yyc12596

新虫 (著名写手)

之前的方法是先转染THP1单核细胞,然后用PMA分化转染后的细胞成巨噬。

但是这种分化24小时内就会导致绝大多数的细胞死亡。谈不上继续分化。
4楼2014-08-01 23:31:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

yyc12596

新虫 (著名写手)

★ ★
youlinglyw: 金币+2, 赠人玫瑰手有余香,生物科学有你更精彩! 2014-08-02 10:51:52
用单核试剂盒来电转THP1的依据来自以下文章:Efficient non-viral transfection of THP-1 cells

2009年的一篇文章。
2楼2014-08-01 23:19:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yyc12596

新虫 (著名写手)

Lonza的单核试剂盒,人原代单核细胞的转染效率在55%左右,细胞存活率在70%。

THP1-derived macrophage(TDM)感觉电转之后细胞的存活率只有50%左右。第二天很多细胞都漂浮或者已经裂解了。
3楼2014-08-01 23:24:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yyc12596

新虫 (著名写手)

转染前THP1分化的方案:
RPMI 1640(10%FBS, 1%双抗,1%L-Glu),50uM 2-ME(Sigma),100ng/ml PMA(Sigma)分化48小时。
5楼2014-08-01 23:34:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 085404 22408 309分求调剂 +9 lzmk 2026-04-14 10/500 2026-04-15 20:02 by 学员JpLReM
[考研] 求调剂 +10 小聂爱学习 2026-04-11 14/700 2026-04-15 19:08 by 黑科技花岗岩
[考研] 289 分105500药学专硕求调剂(找B区学校) +3 白云123456789 2026-04-13 3/150 2026-04-15 12:42 by 西北望—风沙
[考研] 272分材料子求调剂 +41 Loy0361 2026-04-10 54/2700 2026-04-14 18:00 by lhj2009
[考研] 08工学 309分求调剂 +12 Yin DY 2026-04-08 12/600 2026-04-14 17:49 by lhj2009
[考研] 调剂 +12 月@163.com 2026-04-11 12/600 2026-04-14 15:37 by zs92450
[考研] 材料085601调剂 +32 何润采123 2026-04-10 34/1700 2026-04-14 08:47 by 木木mumu~
[考研] 考研求调剂 +12 子木呐 2026-04-12 13/650 2026-04-14 01:19 by 王珺璞
[考研] 0856专硕求调剂 希望是a区院校 +24 好好休息好不好 2026-04-09 27/1350 2026-04-13 22:22 by pies112
[考研] 一志愿西交机械专硕求调剂 +9 求上岸的小王 2026-04-10 9/450 2026-04-13 16:08 by jiangguiquan11
[考研] +10 李多米lee. 2026-04-12 11/550 2026-04-12 22:58 by yuyin1233
[考研] 本科南方医科大学 一志愿985 药学学硕284分 求调剂 +5 弱水听文 2026-04-09 5/250 2026-04-12 13:16 by shengxi123
[考研] 307求调剂 +10 tzq94092 2026-04-10 10/500 2026-04-12 08:18 by wise999
[考研] 085600材料与化工329分求调剂 +16 叶zilin 2026-04-10 16/800 2026-04-11 11:04 by may_新宇
[考研] 一志愿985机械学硕380求调剂 +5 关关雎鸠10 2026-04-11 5/250 2026-04-11 10:10 by 知念。A
[考研] 282,求调剂 +12 jggshjkkm 2026-04-09 14/700 2026-04-11 09:39 by 猪会飞
[考研] 初试261 +3 Asht少 2026-04-10 6/300 2026-04-10 16:38 by Asht少
[考研] 085601初试330分找调剂 +10 流心奶黄包l 2026-04-09 10/500 2026-04-10 08:14 by Sammy2
[考研] 本科211 工科085400 280分求调剂 可跨专业 +3 LZH(等待调剂中 2026-04-09 3/150 2026-04-09 21:29 by wutongshun
[考研] 二次调剂求老师收留 +3 笑笑袁 2026-04-08 3/150 2026-04-08 23:50 by 醉在风里
信息提示
请填处理意见