应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 干扰/敲除 » 植物miRNA干扰载体构建的大体流程
51/1返回列表
查看: 1951  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

Lopick

新虫 (初入文坛)

[求助] 植物miRNA干扰载体构建的大体流程 已有2人参与

各位大神，帮忙介绍一下植物miRNA干扰载体构建的大体流程，急求..............................
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-07-29 17:12:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Lopick

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by usky_4 at 2014-07-29 19:40:41
1. 确定并合成你所要用的miRNA序列

2. 选择适当的植物病毒载体（一般慢病毒的感染效率会比较高），载体最好带有抗性基因/标记基因以便你在感染植物细胞以后可以进行筛选感染成功的细胞

3. 将miRNA克隆到病毒载 ...

师兄，植物的miRNA干扰载体你做过吗？
赞一下 回复此楼
5楼2014-08-24 16:39:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

usky_4

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+5, 鼓励回帖交流！ 2014-07-30 00:59:06
Lopick: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-07-30 10:29:20
Lopick: 金币+1 2014-08-24 16:38:13
1. 确定并合成你所要用的miRNA序列

2. 选择适当的植物病毒载体（一般慢病毒的感染效率会比较高），载体最好带有抗性基因/标记基因以便你在感染植物细胞以后可以进行筛选感染成功的细胞

3. 将miRNA克隆到病毒载体中，和普通的克隆方法是一样的，提取病毒质粒

4. 选择你的病毒载体相应的packaging cell line，转染packaging cells

5. 收集病毒上清液，浓缩病毒颗粒，就可以用来感染植物细胞了

6. 感染植物细胞以后，可以通过抗性基因来筛选感染成功的细胞，也可以通过标记基因(如荧光标记GFP)用流式来筛选感染成功的细胞
赞一下(1人) 回复此楼
下次再见面的时候，我们一定会笑着相遇吧
2楼2014-07-29 19:40:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+4, 鼓励交流 2014-08-24 20:12:12
1.获得你的目的序列。   载体的话，不同实验有不同载体，看你老板让你用哪一个。 一般有基因枪的载体和农杆菌的载体。分析目的序列和载体的酶切位点等等，为下一步做准备。一般农杆菌转化好做，效率高。
2.把目的序列扩增（这里有点麻烦，因为RNAi不好扩增，建议酶切或者走中间载体的路），连到目的载体，转化鉴定测序。
3.得到质粒，打基因枪或者农杆菌侵染植物。
4.等植物生长，鉴定植物是否转入。
5.。。。。。。。一步一步往下做。
赞一下 回复此楼
4楼2014-08-01 10:23:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

木欣欣60

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by Lopick at 2014-08-24 16:39:37
师兄，植物的miRNA干扰载体你做过吗？...

前辈，你现在做了植物的miRNA干扰载体构建了吗？我也一直找不到具体的实验技术手段，听说miRNA sponge效果不错，你现在解决了吗？求前辈赐教！
赞一下 回复此楼
顺顺利利做实验，高高兴兴搞科研，幸幸福福地毕业。
6楼2015-03-27 15:26:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 327求调剂 +6 拾光任染 2026-03-15 11/550 2026-03-15 22:47 by 拾光任染
[考研] 0703化学调剂，求各位老师收留 +7 秋有木北 2026-03-14 7/350 2026-03-15 17:30 by 小物理化学
[考研] 中科大材料专硕319求调剂 +3 孟鑫材料 2026-03-13 3/150 2026-03-14 18:10 by houyaoxu
[考研] 材料080500调剂求收留 +3 一颗meteor 2026-03-13 3/150 2026-03-14 10:54 by peike
[考研] 295复试调剂 +5 简木ChuFront 2026-03-09 5/250 2026-03-14 01:29 by JourneyLucky
[考研] 材料与化工（0856）304求B区调剂 +6 邱gl 2026-03-12 7/350 2026-03-13 23:24 by 邱gl
[考研] 341求调剂 +3 番茄头--- 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:07 by JourneyLucky
[考研] 308求调剂 +5 是Lupa啊 2026-03-11 5/250 2026-03-13 22:13 by JourneyLucky
[考研] 085600调剂 +5 漾漾123sun 2026-03-12 5/250 2026-03-13 22:06 by 星空星月
[考研] 285学硕求调剂 +6 柴郡猫_ 2026-03-12 6/300 2026-03-13 20:46 by hmn_wj
[考研] 26调剂/材料科学与工程/总分295/求收留 +9 2026调剂侠 2026-03-12 9/450 2026-03-13 20:46 by 18595523086
[考研] 求调剂 +7 18880831720 2026-03-11 7/350 2026-03-13 16:10 by JourneyLucky
[考研] 工科材料085601 279求调剂 +8 困于星晨 2026-03-12 10/500 2026-03-13 15:42 by ms629
[考研] 土木第一志愿276求调剂，科研和技能十分丰富，求新兴方向的导师收留 +3 土木小天才 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:01 by JourneyLucky
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +3 崔wj 2026-03-12 4/200 2026-03-12 19:33 by 求调剂zz
[考博] 2026年博士申请 +3 QwQwQW10 2026-03-11 3/150 2026-03-12 17:58 by gxch43
[考研] 研究生招生 +3 徐海涛11 2026-03-10 7/350 2026-03-12 14:26 by 徐海涛11
[基金申请] 提交后的基金本子，已让学校撤回了，可否换口子提交 +3 dut_pfx 2026-03-10 3/150 2026-03-11 08:38 by kudofaye
[考研] 哈工大材料324求调剂 +6 闫旭东 2026-03-10 8/400 2026-03-10 22:49 by 星空星月
[考研] 327分求调剂086 +4 西红柿?小帅 2026-03-09 7/350 2026-03-10 14:47 by ruiyingmiao
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭