【答案】应助回帖

» 猜你喜欢

厚积薄发

1楼2014-07-29 15:36:40

mashuge

银虫 (小有名气)

应助: 8 (幼儿园)
金币: 496.3
红花: 1
帖子: 157
在线: 80小时
虫号: 713534
注册: 2009-03-03
性别: MM
专业: 微生物生态学

引用回帖:

7楼: Originally posted by zb0806030 at 2014-07-30 10:27:01
附件是我今天做的RT-PCR，一共21对引物，每个泳道一对（30cycles），用的引物和模板与q-pcr一样，那从这个结果看模板应该没有问题，有个别引物特异性不太好。最下面一条marker是250bp。是不是就可以确定是引物的问 ...

你的模板用的基因组DNA 还是cDNA ？还有你引物设计时是用的编码mRNA 的那条链吗？

珍惜自己现在拥有的，别等失去才追悔莫及，人只有经历了才会懂才会成熟，加油，未来的日子好好过！

11楼2014-08-02 11:19:44

查看全部 11 个回答

songzuowei

木虫 (著名写手)

应助: 88 (初中生)
金币: 2666.2
散金: 18
红花: 7
帖子: 2058
在线: 98.5小时
虫号: 2469387
注册: 2013-05-17
性别: GG
专业: 生物大分子结构与功能

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
zb0806030(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-07-29 19:10:47

你这啥都没有，问题就大了，模板引物不好都有可能，这根本就没有扩增出东西来嘛，先做个半定量，确定一下引物和模板有无问题

2楼2014-07-29 16:36:40

zb0806030

银虫 (小有名气)

应助: 5 (幼儿园)
金币: 719.5
帖子: 157
在线: 23.1小时
虫号: 2616138
注册: 2013-08-25
专业: 植物学

引用回帖:

2楼: Originally posted by songzuowei at 2014-07-29 16:36:40
你这啥都没有，问题就大了，模板引物不好都有可能，这根本就没有扩增出东西来嘛，先做个半定量，确定一下引物和模板有无问题

这些引物用这个模板做过RT-PCR，能扩出条带，大概30cycles就能出来带了，有个别引物可能有杂带。但大部分都还是可以扩出来一条特异条带的，还有可能有其它原因吗？谢谢

厚积薄发

3楼2014-07-29 19:50:04

songzuowei

木虫 (著名写手)

应助: 88 (初中生)
金币: 2666.2
散金: 18
红花: 7
帖子: 2058
在线: 98.5小时
虫号: 2469387
注册: 2013-05-17
性别: GG
专业: 生物大分子结构与功能

【答案】应助回帖

★ ★
zb0806030: 金币+2, ★有帮助 2014-07-30 09:46:28

引用回帖:

3楼: Originally posted by zb0806030 at 2014-07-29 19:50:04
这些引物用这个模板做过RT-PCR，能扩出条带，大概30cycles就能出来带了，有个别引物可能有杂带。但大部分都还是可以扩出来一条特异条带的，还有可能有其它原因吗？谢谢...

但是从你的扩增曲线和熔解曲线上看确实是没有扩增出东西来，不然的话熔解曲线最起码是有峰的，另：做RT-PCR的引物和做qPCR的引物设计上应该不同你应该知道吧那么是否是你的加样体系或者退火温度存在问题呢？你这个情况可能性太多不好判断

4楼2014-07-30 09:27:03