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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 蛋白质过高效液相色谱的相关问题
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guyifei2007

木虫 (小有名气)

[交流] 蛋白质过高效液相色谱的相关问题

最近小弟在做组蛋白的含量分析，用的是0.1%TFA的水和0.1%TFA的乙腈做为流动相，柱子是C18柱，检测波长210或278，但是就是没有出峰，求这方面得大神给予几个可行的方案或是流动相的比例
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1楼 2014-07-26 09:38:25
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daisyzhangwei

木虫 (职业作家)

不曾来过……
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
要看蛋白的分子量大小，分子量太大的话，大于一万，就需要用大孔径的柱子，200,300A孔径的，如果是分子量几千，小于一万的话，可以考虑普通的分析柱；另外还要根据蛋白的疏水性强弱来选择，如果是亲水的蛋白的话，可以选C18，如果是疏水性较大的蛋白，只能选择短碳链的柱子了，如C8，C4，C5之类的
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人生若只如初见...
11楼2014-07-31 10:58:13
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chenzhengyi

木虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
suruiqin: 金币+2, 感谢参与，欢迎常来分析版交流~ 2014-07-29 11:27:38
要用专用柱子，例如：Aeris WIDEPORE XB-C18色谱柱(4.6 mmi.d ×250 mm，粒径3.6 μm)；而且检测波长一般是214,254；另外你要给出流速和梯度啊！
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有阳光的地方就会有阴影
2楼2014-07-26 11:49:32
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guyifei2007

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by chenzhengyi at 2014-07-26 11:49:32
要用专用柱子，例如：Aeris WIDEPORE XB-C18色谱柱(4.6 mmi.d ×250 mm，粒径3.6 μm)；而且检测波长一般是214,254；另外你要给出流速和梯度啊！

我没有用专门的柱子流速我用的0.5ml/min和1ml/min，现在我还处于摸索条件阶段，都是根据相关文献来的，但是我一上高效液相色谱就只能看到基线，别的什么多不能看到，所以现在我仅想问问那些做过蛋白质高效液相色谱的，他们做实验的一般条件，谢谢拉。
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3楼2014-07-26 14:52:09
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chenzhengyi

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by guyifei2007 at 2014-07-26 14:52:09
我没有用专门的柱子流速我用的0.5ml/min和1ml/min，现在我还处于摸索条件阶段，都是根据相关文献来的，但是我一上高效液相色谱就只能看到基线，别的什么多不能看到，所以现在我仅想问问那些做过蛋白质高效液相色谱 ...

很简单的，流动相B(0.1%TFA乙腈)从5%-90%，时间40min，你告诉我一下你的柱子。型号，长度，填充物信息等。估计你的柱子粒径是不是太小了？不出峰？或者你试着加大样品浓度或者加大进样量
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有阳光的地方就会有阴影
4楼2014-07-29 10:52:14
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