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hajierlove铜虫 (正式写手)
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[求助]
菌液pcr,坐等求助 已有7人参与
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| 今天做的菌液pcr，三个基因挑了48个单克隆，做菌液pcr，引物是M13通用引物，出来的目的条带都是250bp。750bp。目的片段是500bp。怎么回事？只能证明没有连接上吗？ |
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【答案】应助回帖
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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-07-24 21:32:55
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-07-24 21:32:55
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“直接是目的条带”一般是不太可能的，载体的通用引物很少是直接从连接点就开始，除非是你自己设计的引物紧挨着连接位点。之所以看起来是，是因为仅用ladder来确定pcr产物的大小并不是非常精准的，有误差是很正常的事情。你可以试试用你自己引物的pcr产物和通用引物的pcr产物同时跑胶，只要你跑的时间够长，绝对可以看出不同的。只不过片段越大，由引物多扩增出来那1、200bp就越不显著了。这个好理解，100bp和200bp很容易区分，1kbp和1.1kbp就没那么容易分离了。 |
15楼2014-07-24 19:10:24
lijianfu12
银虫 (正式写手)
- 应助: 12 (小学生)
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- 帖子: 333
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- 专业: 植物生理与生化
2楼2014-07-23 21:26:20
3楼2014-07-23 21:40:31
4楼2014-07-23 22:23:16