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张冰宝

新虫 (小有名气)

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专业: 地方病学

[求助] 目的片段与表达载体怎么都连接不上已有3人参与

最近一直在做原核表达，回收后的目的片段与表达载体pet-32a怎么都连接不上，已经试过十多次了，转化阳性质粒确定感受态和板子都没有问题。pet-32a没有问题（因为别的同门就连接上了），目的基因已经经过测序没有问题，就是胶回收后条带偏高一些。我重新回收了好几次结果都偏高。但是我同门回收的也偏高就连上了。。操作应该没有问题，连了半个多月了就是连不上，恳请知道的大侠们能指点一二，看看我这到底是哪出问题了，谢谢大家了

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1楼2014-07-20 17:38:55

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张冰宝

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引用回帖:

5楼: Originally posted by 不爱做实验 at 2014-07-28 10:21:20
方法一：交给你同门，让他做
方法二：参考同门的体系
方法三：重新再做一次，保证每一步没问题
总结：我最近也连不上，每一步又没什么问题，有的时候可能多少和运气有关吧。
另外，尝试将回收的片段用量提高，连 ...

感谢你的帮助，我已经连上了，你说的那些我都试过了，主要原因是回收的不好。胶跑的时间不够长