24小时热门版块排行榜    

查看: 3359  |  回复: 16
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

张冰宝

新虫 (小有名气)

[求助] 目的片段与表达载体怎么都连接不上 已有3人参与

最近一直在做原核表达,回收后的目的片段与表达载体pet-32a怎么都连接不上,已经试过十多次了,转化阳性质粒确定感受态和板子都没有问题。pet-32a没有问题(因为别的同门就连接上了),目的基因已经经过测序没有问题,就是胶回收后条带偏高一些。我重新回收了好几次结果都偏高。但是我同门回收的也偏高就连上了。。操作应该没有问题,连了半个多月了就是连不上,恳请知道的大侠们能指点一二,看看我这到底是哪出问题了,谢谢大家了
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张冰宝

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2014-07-20 21:20:56
你是如何判断没有连上的?
板子上没有长出克隆还是长出了克隆经过鉴定都是假阳性,要说出你的现象,否则简单的连不上可能原因太多了。

有两次板子长了两三个克隆,我做的菌液pcr证实是假阳性。其他的就都是空板子了
3楼2014-07-21 08:26:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 17 个回答

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-07-21 08:25:46
你是如何判断没有连上的?
板子上没有长出克隆还是长出了克隆经过鉴定都是假阳性,要说出你的现象,否则简单的连不上可能原因太多了。
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2014-07-20 21:20:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

引用回帖:
3楼: Originally posted by 张冰宝 at 2014-07-21 08:26:21
有两次板子长了两三个克隆,我做的菌液pcr证实是假阳性。其他的就都是空板子了...

再说说你的连接体系和连接条件吧
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
4楼2014-07-27 20:48:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

不爱做实验

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


张冰宝(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-07-28 11:12:02
方法一:交给你同门,让他做
方法二:参考同门的体系
方法三:重新再做一次,保证每一步没问题
总结:我最近也连不上,每一步又没什么问题,有的时候可能多少和运气有关吧。
另外,尝试将回收的片段用量提高,连接时间再延长,可以尝试连接一天一夜。
5楼2014-07-28 10:21:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 看板上这么多中的,有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +3 a089 2026-08-26 3/150 2026-08-26 23:21 by young90
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 +4 晴天加油 2026-08-26 5/250 2026-08-26 21:27 by 木风9012
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +7 process2012 2026-08-23 10/500 2026-08-26 19:23 by hmhminy
[基金申请] 系统查不到 +10 董八千 2026-08-26 10/500 2026-08-26 16:30 by Equinoxhua
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件,有关系吗? +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +23 koalala 2026-08-24 26/1300 2026-08-26 14:29 by 宝贝虫子
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 科研孤儿太难了 +21 我4大白菜 2026-08-20 22/1100 2026-08-26 11:29 by nlgza
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 国合现在查不到了吗? +10 chengyan1220 2026-08-24 20/1000 2026-08-26 08:57 by peasantsprig
[基金申请] 牛来!米来!面来! +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候,我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
[基金申请] 明天应该可查了!? +6 chengyan1220 2026-08-23 6/300 2026-08-25 19:45 by zfd97
[基金申请] 今日不放榜?网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +17 医学老男孩 2026-08-20 22/1100 2026-08-25 15:36 by 医学老男孩
[教师之家] 导师吐槽:我怎么摊上了这么个极品研究生! +3 苏东坡二世 2026-08-23 3/150 2026-08-25 10:35 by shisan1313
[基金申请] 我面上完蛋了 +13 且听虎啸 2026-08-20 14/700 2026-08-25 09:10 by mrkang
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办? +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 看来今天不会放榜了? +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
信息提示
请填处理意见