应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 目的片段与表达载体怎么都连接不上
171/2返回列表12下一页
查看: 3368  |  回复: 16
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

张冰宝

新虫 (小有名气)

[求助] 目的片段与表达载体怎么都连接不上 已有3人参与

最近一直在做原核表达，回收后的目的片段与表达载体pet-32a怎么都连接不上，已经试过十多次了，转化阳性质粒确定感受态和板子都没有问题。pet-32a没有问题（因为别的同门就连接上了），目的基因已经经过测序没有问题，就是胶回收后条带偏高一些。我重新回收了好几次结果都偏高。但是我同门回收的也偏高就连上了。。操作应该没有问题，连了半个多月了就是连不上，恳请知道的大侠们能指点一二，看看我这到底是哪出问题了，谢谢大家了
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-07-20 17:38:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 张冰宝 at 2014-07-28 12:51:08
谢谢你 ，我已经找到问题了，主要出在我的目的片段上...

恩啊   好好总结下经验   祝你实验顺利
赞一下(2人) 回复此楼
10楼2014-07-28 14:39:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张冰宝

新虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-07-28 14:39:00
恩啊   好好总结下经验   祝你实验顺利...

非常感谢大家的帮助
赞一下(1人) 回复此楼
12楼2014-07-29 08:50:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-07-21 08:25:46
你是如何判断没有连上的？
板子上没有长出克隆还是长出了克隆经过鉴定都是假阳性，要说出你的现象，否则简单的连不上可能原因太多了。
赞一下 回复此楼
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2014-07-20 21:20:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张冰宝

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2014-07-20 21:20:56
你是如何判断没有连上的？
板子上没有长出克隆还是长出了克隆经过鉴定都是假阳性，要说出你的现象，否则简单的连不上可能原因太多了。

有两次板子长了两三个克隆，我做的菌液pcr证实是假阳性。其他的就都是空板子了
赞一下 回复此楼
3楼2014-07-21 08:26:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
引用回帖:
3楼: Originally posted by 张冰宝 at 2014-07-21 08:26:21
有两次板子长了两三个克隆，我做的菌液pcr证实是假阳性。其他的就都是空板子了...

再说说你的连接体系和连接条件吧
赞一下 回复此楼
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
4楼2014-07-27 20:48:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

不爱做实验

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
张冰宝(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-07-28 11:12:02
方法一：交给你同门，让他做
方法二：参考同门的体系
方法三：重新再做一次，保证每一步没问题
总结：我最近也连不上，每一步又没什么问题，有的时候可能多少和运气有关吧。
另外，尝试将回收的片段用量提高，连接时间再延长，可以尝试连接一天一夜。
赞一下 回复此楼
5楼2014-07-28 10:21:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

上体系    上条件    上你的载体、片段的大小、浓度等详细信息
赞一下 回复此楼
6楼2014-07-28 10:55:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张冰宝

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2014-07-20 21:20:56
你是如何判断没有连上的？
板子上没有长出克隆还是长出了克隆经过鉴定都是假阳性，要说出你的现象，否则简单的连不上可能原因太多了。

谢谢大家的帮忙，已经连接上了 今天去测序了。主要的原因还是我回收的目的片段有问题。
赞一下 回复此楼
7楼2014-07-28 12:49:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张冰宝

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 不爱做实验 at 2014-07-28 10:21:20
方法一：交给你同门，让他做
方法二：参考同门的体系
方法三：重新再做一次，保证每一步没问题
总结：我最近也连不上，每一步又没什么问题，有的时候可能多少和运气有关吧。
另外，尝试将回收的片段用量提高，连 ...

感谢你的帮助 ，我已经连上了 ，你说的那些我都试过了，主要原因是回收的不好。胶跑的时间不够长
赞一下 回复此楼
8楼2014-07-28 12:50:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张冰宝

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-07-28 10:55:02
上体系    上条件    上你的载体、片段的大小、浓度等详细信息

谢谢你 ，我已经找到问题了，主要出在我的目的片段上
赞一下 回复此楼
9楼2014-07-28 12:51:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 张冰宝 的主题更新
171/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +6 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 7/350 2026-08-30 18:18 by hZiFeudZyoGR
[博后之家] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +7 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 8/400 2026-08-30 18:07 by hZiFeudZyoGR
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 6/300 2026-08-30 17:47 by hZiFeudZyoGR
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 7/350 2026-08-30 17:45 by hZiFeudZyoGR
[找工作] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 10/500 2026-08-30 17:36 by hZiFeudZyoGR
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +5 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 6/300 2026-08-30 17:25 by hZiFeudZyoGR
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的？ +17 爱看书的可乐 2026-08-26 19/950 2026-08-30 16:34 by xiangy672
[考博] 找导师 +6 yuanjiabao 2026-08-29 7/350 2026-08-30 14:40 by 生科新手
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 jCd0dEvKHShX 2026-08-29 4/200 2026-08-30 13:54 by GkCVyODlx4mR
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 jCd0dEvKHShX 2026-08-29 6/300 2026-08-30 13:54 by GkCVyODlx4mR
[论文投稿] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 7/350 2026-08-30 11:51 by l0VvVHGBGRLv
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见（F口面上） +6 gdd2018 2026-08-28 11/550 2026-08-30 08:58 by 超级无敌华子
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 G6APbkg8SA6w 2026-08-29 4/200 2026-08-30 07:28 by ZPa0EcMwuECS
[基金申请] 国社科申报系统有变化 +3 kynobel 2026-08-23 3/150 2026-08-29 21:57 by 余韵清
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件，有关系吗？ +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
[基金申请] 牛来！米来！面来！ +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
[基金申请] 明天应该可查了！？ +6 chengyan1220 2026-08-23 6/300 2026-08-25 19:45 by zfd97
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑，不妨来听听这首《基金之外》 +8 scalable 2026-08-24 8/400 2026-08-25 12:52 by jnhyjjm
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭