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swach

铁虫 (小有名气)

[求助] 大神帮忙看看基因组检测是什么问题?有什么解决方法?已有2人参与

昨天提的基因组,用的是omega的试剂盒。因为一直提的不好,同学有一个师姐留下的试剂盒,也是omega的,我打客服问了一下,说是可以纯化DNA,我就用了。在用omega土壤提取试剂盒提完基因组之后,我用这个omega MicroElute DNA Clean-Up Ki试剂盒把基因组进行纯化。紫外检测结果见图,A260/230达到了1.9,之前从来没有高过0.1的,是什么问题!有什么方法可以补救吗?因为要去测高通量,所以很着急,大家帮忙啦!

大神帮忙看看基因组检测是什么问题?有什么解决方法?
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luwei13566

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-07-18 14:43:17
1.A260/A230主要表征小分子糖,盐类,有机溶剂的污染,将你的核酸多用70%乙醇漂洗两次,之后彻底晾干乙醇能提高该数值,最好能>2.0,一般1.5以上都可以了。
2.你图上第一个样品蛋白没有除净
大家相互帮助哈
4楼2014-07-18 14:05:17
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luwei13566

木虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by swach at 2014-07-18 16:50:55
那之前我们提的A260/230都在0.1一下,是不是代表核酸污染很严重啊?这次核酸我用乙醇洗了四次了,还是不好。还有,如果有腐殖酸的影响的话,260/280以及260/230是怎么变化呢?我一直弄不懂这个,之前一直都只看260 ...

乙醇漂洗后乙醇晾彻底了没??
大家相互帮助哈
6楼2014-07-18 19:47:20
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luwei13566

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2014-07-19 16:53:05
用乙醇漂洗可不像回收和纯化试剂盒的柱子那样可以空离,你最好还是多晾一会或者直接真空干燥
大家相互帮助哈
8楼2014-07-18 20:45:04
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luwei13566

木虫 (正式写手)

引用回帖:
9楼: Originally posted by swach at 2014-07-18 21:06:19
恩,我想问问蛋白污染是不是就是表现在260/280低呢...

260/280低于1.8属于有蛋白残留
大家相互帮助哈
10楼2014-07-18 21:49:02
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luwei13566

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2014-07-19 16:53:23
引用回帖:
11楼: Originally posted by swach at 2014-07-19 08:55:00
我用的是omega的土壤提取试剂盒,不知道里面去除蛋白质的是哪种试剂,如果自己处理的话,用什么试剂呢?...

1.刚才看了看说明书,除蛋白应该在Buffer SP2这一步,下一步说明书上说的很清楚,需要谨慎的将上清转移到新离心管中,如果吸的多了可能就吸到蛋白了,可以少吸点。
2.你以前A260/A230很低的基因组不是用试剂盒提的吧,土壤中很多植酸、糖类用一般的基因组提取法很难除净的。所以你还是用试剂盒提吧。
大家相互帮助哈
12楼2014-07-19 12:01:40
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