应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » WB背景黑是什么原因？
51/1返回列表
查看: 12478  |  回复: 11
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

ljy241

新虫 (小有名气)

[交流] WB背景黑是什么原因？已有9人参与

我做一个分子量为180kd的蛋白wb，用7%的分离胶，60v转膜3h，5%milk封闭1h，一抗1：1000过夜（内参b-actin 1：1000），TBST 30minx5，二抗1：5000孵育1h，TBST 10x3，ECL显色，胶片曝光，内参很清楚，也很干净，但目的蛋白背景很黑，曝光之前肉眼都能看到整张膜都发亮，但条带还能看出来，请教各位是什么原因。
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

分子生化实验经验积累 蛋白质生物学实验经验 生物化学

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼2014-07-17 10:06:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hailey

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
现在我也遇到这个问题，准备缩短二抗的时间试试
赞一下 回复此楼
时刻为梦想而战！！
10楼2014-08-12 22:55:36
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

ljy241

新虫 (小有名气)
一抗有可能有点问题，但有时候做背景会低点。不知道是不是二抗浓度太高了，准备试下1：10000的
赞一下 回复此楼
3楼2014-07-17 11:20:52
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
youlinglyw: 金币+3 2014-07-18 12:54:56
背景黑可能有以下几个原因：
1. 没有封闭好，但这个可能很小

2. 一抗浓度太高，适当降低增加一抗稀释比例，你最好先做个titration，确定一个最佳的抗体稀释比例

3. 二抗孵育时间太长，一般室温45min，二抗切不可孵育时间太长
赞一下 回复此楼
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
4楼2014-07-17 12:49:04
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ljy241

新虫 (小有名气)
我比较怀疑二抗，一抗的比例我以前做也没那么深的背景。这次试试二抗浓度降低，时间缩短
赞一下 回复此楼
5楼2014-07-17 12:53:31
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复(可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭