应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 反向PCR扩不出来
41/1返回列表
查看: 1294  |  回复: 4
查看全部回帖 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

博克侬浮码

银虫 (小有名气)

[求助] 反向PCR扩不出来

最近在扩PCR，有一个基因明明已经扩出来了，但是用这个基因的序列扩反向PCR却怎么都扩不出来，请各位前辈们支支招，不胜感激！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-07-16 16:08:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

博克侬浮码

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 凌波丽 at 2014-07-17 02:56:29
反向PCR操作应该注意

1.分离的基因组DNA应该达到一定纯度，以利用后面的酶切、连接盒PCR扩增。还要足以用超滤方法除去乙醇，不然连接反应会有困难。DNA溶解于TE缓冲溶液中，pH=8.0。
2.基因组DNA的复杂程度不要 ...

很赞，但是我想做的是用反向PCR扩出来环状中间体，没有用到酶切什么的，最近在做克隆，目的片段和穿梭载体双酶切后连接却怎么都连接不上，没有结合子生长，还请前辈支招，不胜感激！
赞一下 回复此楼
3楼2014-07-17 09:32:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

博克侬浮码

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by luwei13566 at 2014-07-17 11:06:02
是否是用反向PCR构建重组载体？

不是，是验证一个新基因在质粒上，在耐药传播中以环状中间体的形式扩散，做了两个多月了，还是结合不上
赞一下 回复此楼
5楼2014-07-19 15:16:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 博克侬浮码 的主题更新
41/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭