应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 定点饱和突变方法求助
51/1返回列表
查看: 10125  |  回复: 11
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

厚德求是

木虫 (著名写手)

[求助] 定点饱和突变方法求助已有2人参与

求助！
问题正如题目所说，本人课题涉及蛋白质工程，目前为止由定点突变技术寻找到几个对正向突变点。现在希望对其进行定点饱和突变，以期找到更好突变效果。
但是实验室没有过有类似工作经历的人，所以想跪求各位有过类似试验经验的虫友指点一二，大概问题主要有：
1，如何设计引物，是否和定点突变引物设计类似，希望随机突变的碱基用什么来表示？
2，PCR体系如何建立，关键是用什么酶？
3，Protocol如何设置，退火温度是否要和引物的Tm相关联，退火和延伸时间分别是多少？
兄弟真的是第一次做，如果问了无知问题还请大侠包含~
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼2014-07-12 14:40:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

厚德求是

木虫 (著名写手)
继续自己顶...我看我还是再找找文献什么的吧，但是有人能说一下自己当时是怎么做的就好了啦！
赞一下 回复此楼
5楼2014-10-15 10:01:50
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

厚德求是

木虫 (著名写手)
没人理，自己顶一下。。。我看到文献中说“用于定点饱和突变的引物序列”中有“NNN”它说代表“简并引物”这是什么意思啊？让公司合成难道就写“NNN”？请做过的大侠教我一下
赞一下 回复此楼
2楼2014-07-13 11:13:28
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

跳跳豆芽

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
厚德求是(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-07-15 18:50:32
厚德求是: 金币+3, ★有帮助 2014-07-17 18:42:24
厚德求是: 金币+6, ★★★★★最佳答案 2014-11-23 20:37:21
可以用NNN表示也可以用NNK表示，其中K代表C/G。
赞一下(2人) 回复此楼
学无止境
3楼2014-07-15 14:29:34
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huangrui1988

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

商家已经主动声明此回帖可能含有宣传内容
你可以留QQ以及发序列给我，我帮你设计。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2014-07-15 18:53:57
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭