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汕头大学海洋科学接受调剂
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厚德求是

木虫 (著名写手)

Ph. D. Prof.

[求助] 定点饱和突变方法求助 已有2人参与

求助!
问题正如题目所说,本人课题涉及蛋白质工程,目前为止由定点突变技术寻找到几个对正向突变点。现在希望对其进行定点饱和突变,以期找到更好突变效果。
但是实验室没有过有类似工作经历的人,所以想跪求各位有过类似试验经验的虫友指点一二,大概问题主要有:
1,如何设计引物,是否和定点突变引物设计类似,希望随机突变的碱基用什么来表示?
2,PCR体系如何建立,关键是用什么酶?
3,Protocol如何设置,退火温度是否要和引物的Tm相关联,退火和延伸时间分别是多少?
兄弟真的是第一次做,如果问了无知问题还请大侠包含~
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跳跳豆芽

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
厚德求是(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-07-15 18:50:32
厚德求是: 金币+3, 有帮助 2014-07-17 18:42:24
厚德求是: 金币+6, ★★★★★最佳答案 2014-11-23 20:37:21
可以用NNN表示也可以用NNK表示,其中K代表C/G。
学无止境
3楼2014-07-15 14:29:34
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厚德求是

木虫 (著名写手)

Ph. D. Prof.

没人理,自己顶一下。。。我看到文献中说“用于定点饱和突变的引物序列”中有“NNN”它说代表“简并引物”这是什么意思啊?让公司合成难道就写“NNN”?请做过的大侠教我一下
2楼2014-07-13 11:13:28
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huangrui1988

铜虫 (小有名气)


【答案】应助回帖

商家已经主动声明此回帖可能含有宣传内容
你可以留QQ以及发序列给我,我帮你设计。
4楼2014-07-15 18:53:57
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厚德求是

木虫 (著名写手)

Ph. D. Prof.

继续自己顶...我看我还是再找找文献什么的吧,但是有人能说一下自己当时是怎么做的就好了啦!
5楼2014-10-15 10:01:50
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