应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 定点饱和突变方法求助
汕头大学海洋科学接受调剂
121/2返回列表12下一页
查看: 10363  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

厚德求是

木虫 (著名写手)

Ph. D. Prof.

[求助] 定点饱和突变方法求助 已有2人参与

求助！
问题正如题目所说，本人课题涉及蛋白质工程，目前为止由定点突变技术寻找到几个对正向突变点。现在希望对其进行定点饱和突变，以期找到更好突变效果。
但是实验室没有过有类似工作经历的人，所以想跪求各位有过类似试验经验的虫友指点一二，大概问题主要有：
1，如何设计引物，是否和定点突变引物设计类似，希望随机突变的碱基用什么来表示？
2，PCR体系如何建立，关键是用什么酶？
3，Protocol如何设置，退火温度是否要和引物的Tm相关联，退火和延伸时间分别是多少？
兄弟真的是第一次做，如果问了无知问题还请大侠包含~
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-07-12 14:40:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

跳跳豆芽

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
厚德求是(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-07-15 18:50:32
厚德求是: 金币+3, ★有帮助 2014-07-17 18:42:24
厚德求是: 金币+6, ★★★★★最佳答案 2014-11-23 20:37:21
可以用NNN表示也可以用NNK表示，其中K代表C/G。
赞一下(2人) 回复此楼
学无止境
3楼2014-07-15 14:29:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huangrui1988

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

商家已经主动声明此回帖可能含有宣传内容
你可以留QQ以及发序列给我，我帮你设计。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2014-07-15 18:53:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

厚德求是

木虫 (著名写手)

Ph. D. Prof.
没人理，自己顶一下。。。我看到文献中说“用于定点饱和突变的引物序列”中有“NNN”它说代表“简并引物”这是什么意思啊？让公司合成难道就写“NNN”？请做过的大侠教我一下
赞一下 回复此楼
2楼2014-07-13 11:13:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

厚德求是

木虫 (著名写手)

Ph. D. Prof.
继续自己顶...我看我还是再找找文献什么的吧，但是有人能说一下自己当时是怎么做的就好了啦！
赞一下 回复此楼
5楼2014-10-15 10:01:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tea11111

新虫 (初入文坛)
楼主，我也有这个疑问，想知道做饱和突变，是每种突变都要设计一个相应的引物吗？还是有更好的方法？你最后是怎么做的
赞一下 回复此楼
6楼2015-07-11 10:45:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xl249848

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by tea11111 at 2015-07-11 10:45:13
楼主，我也有这个疑问，想知道做饱和突变，是每种突变都要设计一个相应的引物吗？还是有更好的方法？你最后是怎么做的

我也想问这个问题
赞一下 回复此楼
7楼2018-03-02 10:02:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xl249848

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 厚德求是 at 2014-07-13 11:13:28
没人理，自己顶一下。。。我看到文献中说“用于定点饱和突变的引物序列”中有“NNN”它说代表“简并引物”这是什么意思啊？让公司合成难道就写“NNN”？请做过的大侠教我一下

我也想问饱和定点突变的问题，有相关资料可以分享吗
赞一下 回复此楼
8楼2018-03-02 10:07:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

HHHH0099

银虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by xl249848 at 2018-03-02 10:07:12
我也想问饱和定点突变的问题，有相关资料可以分享吗...

同求
回复此楼
9楼2018-04-18 19:24:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冷血孤峰

银虫 (小有名气)
楼主，我也想问这个问题，我需要通过计算机来模拟突变最终用实验来验证。
赞一下 回复此楼
10楼2018-08-23 10:30:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 厚德求是 的主题更新
121/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿西交机械专硕求调剂 +9 求上岸的小王 2026-04-10 9/450 2026-04-13 16:08 by jiangguiquan11
[考研] 085600材料与化工，求调剂 +13 won_qii 2026-04-07 13/650 2026-04-13 14:22 by 张zhihao
[考研] 272分材料子求调剂 +41 Loy0361 2026-04-10 53/2650 2026-04-13 14:20 by 张zhihao
[考研] 290求调剂 +18 柯淮然 2026-04-12 20/1000 2026-04-13 12:56 by cyh—315
[考研] 考研英一数一338分 +6 长江大学东校区 2026-04-13 7/350 2026-04-13 09:40 by fqwang
[考研] 一志愿华工085600 331分 +7 天下ww 2026-04-09 7/350 2026-04-13 09:01 by lhj2009
[考研] 368化学求调剂 +14 wwwwabcde 2026-04-07 15/750 2026-04-13 08:36 by lhj2009
[考研] 求助调剂，跨调 +12 X十甫寸Y 2026-04-11 12/600 2026-04-12 10:20 by zhouyuwinner
[考研] 22专硕求调剂 +6 haoyun上岸 2026-04-11 8/400 2026-04-11 23:21 by labixiaoqiao
[考研] 调剂 +10 只叙离别辞 2026-04-09 12/600 2026-04-11 20:57 by 逆水乘风
[考研] 农学0904 312求调剂 +3 Say Never 2026-04-11 3/150 2026-04-11 17:22 by daydayup2005
[考研] 085410-273求调剂 +6 X1999 2026-04-10 6/300 2026-04-11 10:32 by Delta2012
[考研] 281求调剂 +11 觉得好的吧 2026-04-10 11/550 2026-04-11 09:35 by 逆水乘风
[考研] 一志愿东北大学控制工程085406数二英二385，求调剂 +8 Ezra_Zhang 2026-04-09 8/400 2026-04-11 09:15 by 猪会飞
[考研] 本科西工大 324求调剂 +4 wysyjs25 2026-04-10 4/200 2026-04-10 20:00 by 来看流星雨10
[考研] 求调剂 材料与工程 324分 专硕 +19 翩翩一书生 2026-04-10 21/1050 2026-04-10 11:41 by wp06
[考研] 复试调剂，一志愿郑州大学材料与化工289分 +31 硕星赴 2026-04-08 31/1550 2026-04-09 16:54 by Delta2012
[考研] 085404，334分，求调剂 +5 sunjie8888 2026-04-08 8/400 2026-04-09 07:26 by sunjie8888
[考研] 293分求调剂，外语为俄语 +7 加一一九 2026-04-07 10/500 2026-04-08 20:14 by yutian743
[考研] 277求调剂 +4 考研调剂lxh 2026-04-06 6/300 2026-04-08 10:40 by 逆水乘风
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭