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厚德求是

木虫 (著名写手)

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[求助] 定点饱和突变方法求助已有2人参与

求助！

问题正如题目所说，本人课题涉及蛋白质工程，目前为止由定点突变技术寻找到几个对正向突变点。现在希望对其进行定点饱和突变，以期找到更好突变效果。
但是实验室没有过有类似工作经历的人，所以想跪求各位有过类似试验经验的虫友指点一二，大概问题主要有：
1，如何设计引物，是否和定点突变引物设计类似，希望随机突变的碱基用什么来表示？
2，PCR体系如何建立，关键是用什么酶？
3，Protocol如何设置，退火温度是否要和引物的Tm相关联，退火和延伸时间分别是多少？
兄弟真的是第一次做，如果问了无知问题还请大侠包含~

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1楼 2014-07-12 14:40:02

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NXKY

禁虫

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12楼2022-12-10 13:45:59

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厚德求是

木虫 (著名写手)

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没人理，自己顶一下。。。我看到文献中说“用于定点饱和突变的引物序列”中有“NNN”它说代表“简并引物”这是什么意思啊？让公司合成难道就写“NNN”？请做过的大侠教我一下

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2楼2014-07-13 11:13:28

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跳跳豆芽

铁虫 (初入文坛)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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厚德求是(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-07-15 18:50:32
厚德求是: 金币+3, ★有帮助 2014-07-17 18:42:24
厚德求是: 金币+6, ★★★★★最佳答案 2014-11-23 20:37:21

可以用NNN表示也可以用NNK表示，其中K代表C/G。

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学无止境