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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » 一端为黏性末端一端为平末端的连接方法
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zb0806030

银虫 (小有名气)

[求助] 一端为黏性末端一端为平末端的连接方法 已有3人参与

现在在做克隆，一端为PstI，一端为SmaI（平端），克隆后连接了全式金的T3载体，现在双酶切片段和载体后连接不上，哪位提供点好的建议，谢谢！
我用的T4连接酶是NEB的，体系10微升，4度连接过夜转化后也不长。
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厚积薄发
1楼 2014-07-10 19:07:04
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moshangchenx

金虫 (正式写手)
楼主，您好！不知道您最终是怎么解决这个问题的，我现在做的这个一端平一端粘都快两个月了，还是连不上,请您赐教！
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科研无止境，我心成蹉跎
6楼2015-01-12 16:43:32
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求生小曼

铁虫 (初入文坛)
★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-07-11 16:52:49
本帖内容被屏蔽
2楼2014-07-11 12:23:37
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zb0806030

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 求生小曼 at 2014-07-11 12:23:37
LZ你好，你的问题我也遇到过，首先建议你要保证你的酶（快切酶和连接酶）都是有活性的，其次就是按pEASY-T3载体的说明书来就行了，说实话，你说用T3载体，我真的没发现你说的SmaI位点在哪？
  你不能直接连上吗（T ...

我已经连接到T载体上了，现在是从T载体上用PstI/SmaI酶切连接目的载体连不上，谢谢
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厚积薄发
3楼2014-07-14 09:51:15
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fghjkyt

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-07-15 08:41:26
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=7221202&fpage=1
参见上面这个帖子
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4楼2014-07-14 10:23:08
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