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xy656691

金虫 (正式写手)

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[求助] 关于EMSA实验的一些问题已有2人参与

1、我合成的探针是在5‘端标记的生物素，合成好的是单链。那么在PCR上退火使两条探针形成双链之后是直接使用PCR产物进行下步实验还是对PCR产物进行纯化之后再使用？
2、我使用的试剂盒是Throme的，实验步骤里说要使用6%的非变性聚丙烯酰胺凝胶，请问这个怎么配制？由于没有加入SDS，在电泳的时候要考虑蛋白自身的电荷吗？（如何保证蛋白电泳时的方向）

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1楼 2014-07-10 15:33:10

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cyb1221

铁虫 (初入文坛)

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引用回帖:

2楼: Originally posted by zhouxiaohan at 2014-07-16 10:17:19
1.探针需要纯化后再使用。
2.6%非变性胶配方
30%Acr-Bis(29:1)  2.4ml
5xTBE                2.4ml
ddH2O             7.2ml
10%AP             200ul
TEMED             10ul

请问EMSA探针互补的两条链都要加上生物素标记吗？本人小白一个，第一次设计，很懵········希望能不吝赐教！谢谢！