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王宝明WANG

新虫 (初入文坛)

[求助] 大片段连接

我的外源片段是8000bp(CLA1,PAC1双切)想与腺病毒骨架(切后为28000bp)连接,小弟目前已经连接一年之久,但就是连接不上,每次转化长的斑很少,最多时也不超过30个。麻烦大神们帮帮,谢谢了。
目前我想到的方法有:1、换了商用化的DH5感受态 2、换了不同的腺病毒载体 3、换了不同的连接酶 4、摸过不同的连接比例
我认为可能有点问题:1、我的酶切产物都是一直放在四度 ,有可能有部分降解。
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