24小时热门版块排行榜

>论坛更新日志 (2120)
>休闲灌水 (386)
>虫友互识 (370)
>导师招生 (125)
>高分子 (53)
>考博 (33)
>文献求助 (30)
>留学DIY (23)
>论文投稿 (23)
>招聘信息布告栏 (14)
>博后之家 (13)
>学术会议 (12)
>标准与专利 (7)
>硕博家园 (5)
>找工作 (4)
>考研 (3)

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

zhaoxiaopang

金虫 (小有名气)

应助: 1 (幼儿园)
金币: 159.3
帖子: 183
在线: 90.5小时
虫号: 2647510
注册: 2013-09-11
性别: MM
专业: 生物化工与食品化工

[求助] 酶切连接连不上，要死了已有10人参与

如题，最近构建质粒，载体是pIMP，使用的是单酶切位点Nde1.然后用一步克隆的方法做连接转化，感受态是DH5&，做了四五次都是连不上，长出来的单菌落做PCR结果目的条带都P不出来，不知道是什么原因。换了新的一步克隆试剂盒做对比依然还是连不上，求大神分析分析啊。。。。。。

回复此楼

» 猜你喜欢

ADC标杆分子T-DM1全解析：从结构设计到实验室应用的技术要点已经有0人回复
HILIC磁珠研究蛋白组学怎么做？已经有0人回复
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费? 已经有278人回复
His标签蛋白纯化怎么才能快？已经有0人回复
WRN变构抑制剂HRO761：从D1/D2界面锁定到MSI合成致死的工具化合物深度解析已经有0人回复
KRAS G12V(ON) 选择性抑制剂 RMC-5127：从三元复合物机制到科研应用已经有0人回复
SHP2 变构抑制剂 Sitneprotafib：从作用机制到科研试剂选型要点已经有0人回复
PRMT5·MTA 抑制剂 MRTX1719 的科研应用已经有0人回复
SW033291 科研使用解析：分子特征、储存与实验获取要点已经有0人回复
泛 RAS 抑制新思路：大环肽拟似物如何同时牵住突变型与野生型 RAS？已经有0人回复
TYK2/JAK1 双靶点工具化合物 Brepocitinib：激酶选择性、研究进展与实验应用全解析已经有0人回复

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

1楼 2014-07-08 15:37:24

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

zhaoxiaopang

金虫 (小有名气)

应助: 1 (幼儿园)
金币: 159.3
帖子: 183
在线: 90.5小时
虫号: 2647510
注册: 2013-09-11
性别: MM
专业: 生物化工与食品化工

引用回帖:

13楼: Originally posted by jamesfeng at 2014-07-09 20:58:29
同学你用过T5没？我意思是用这个方法基因片段5‘和3’端都必须有与载体片段切口端有15bp左右的overlap,如果同学没用过的话，可以找找该方法的文献看看！这个方法如有条件的话，非常好用

我觉得你说的那个方法跟我的这个一步克隆的方法是一样的，我的也是有同源臂，但是用这个方法连接了好几次均不成功，郁闷死了，现在考虑载体单酶切线性化应该没有问题，感受态貌似也不会有问题，现在总是连不上但是能在抗性平板上长就觉得是片段的问题