应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 做QPCR实验时没有CT值（信号）出现，有哪些可能的原因？
121/2返回列表12下一页
查看: 15292  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

蛋蛋的哥

新虫 (初入文坛)

[求助] 做QPCR实验时没有CT值（信号）出现，有哪些可能的原因？

这是从Trans 实验室常见问题和解答中找到的，总觉得还有其他的什么原因？
引用回帖:
可能原因： （1）反应循环数不够
对策：35个循环以上，可根据实验情况增加循环（如至45cycles），但高于45个循环会增加过多的背景信号。
（2）测荧光信号的步骤有误
对策：一般SG法采用72℃延伸时采集，Taqman法则一般在退火结束时或延伸结束采集信号。
（3）引物或探针降解
对策：可通过PAGE电泳检测其完整性。
（4）引物或探针的设计 如探针高于引物的温度不够，造成探针未杂交上而产物已延伸的情况。
对策：重新设计引物或探针
（5）模板量不足
对策：对未知浓度的样品应从系列稀释样本的最高浓度做起。
（6）模板降解
对策：避免样品制备中杂质的引入及反复冻融的情况。

没多少金币  就拿5个意思一下   希望能再帮想想好还有哪些可能的原因会造成这种现象。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-07-04 14:05:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pzx1004
★
蛋蛋的哥(金币+1): 谢谢参与
祝福

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2014-07-04 14:06:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaoyan1978
★
蛋蛋的哥(金币+1): 谢谢参与
3楼2014-07-04 14:09:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cxjzly2008
★
蛋蛋的哥(金币+1): 谢谢参与
4楼2014-07-04 14:31:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kiss20085537
★
蛋蛋的哥(金币+1): 谢谢参与
7
5楼2014-07-04 14:38:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

SCI-ICS
★
蛋蛋的哥(金币+1): 谢谢参与
祝福
6楼2014-07-04 14:39:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

奋斗老青年
7楼2014-07-04 16:07:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhangyunjing

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-07-04 22:32:20
做的是染料法的还是探针法的QPCR？可以将QPCR的产物跑个琼脂糖凝胶电泳看看有没有目的条带，染料法的如果有目的条带的话，肯定是Mix的问题，如果探针法的话可能是因为探针没有与模板结合。
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

蛋蛋的哥
rainwater
8楼2014-07-04 16:35:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lrfmog

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
程序有误，没有设定"READ"
赞一下 回复此楼
9楼2014-07-04 21:52:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

蛋蛋的哥

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
8楼: Originally posted by zhangyunjing at 2014-07-04 16:35:12
做的是染料法的还是探针法的QPCR？可以将QPCR的产物跑个琼脂糖凝胶电泳看看有没有目的条带，染料法的如果有目的条带的话，肯定是Mix的问题，如果探针法的话可能是因为探针没有与模板结合。

探针法的    非常感谢你   通过Transgen的微客服咨询了他们的技术，已经得到解决了
赞一下 回复此楼
10楼2014-07-08 16:27:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 蛋蛋的哥 的主题更新
121/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +4 瞬息宇宙 2026-08-10 4/200 2026-08-11 02:02 by 旁观2020
[基金申请] 基金中了 +15 laoda193707 2026-08-06 15/750 2026-08-11 00:11 by jiafei2190
[基金申请] 帮忙看看fileCode +4 wwncly 2026-08-10 8/400 2026-08-10 22:07 by demonstreets
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的，真有人买论文么？感觉没必要啊 +3 Tide man 2026-08-10 3/150 2026-08-10 21:48 by GZUZM
[基金申请] 确定了，国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分？ +10 yufeiwaner 2026-08-09 11/550 2026-08-10 18:47 by yufeiwaner
[基金申请] 我的国基提前知道中了，可是同事的操作让我实在接受不了，怎么会有这样的人 +8 家与远方 2026-08-10 11/550 2026-08-10 17:09 by 六两废铜
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +3 majunge000 2026-08-10 3/150 2026-08-10 15:46 by lch2012
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +14 Lanmanbaby 2026-08-09 22/1100 2026-08-10 14:57 by wwncly
[基金申请] 奇怪，两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +4 布布和一二 2026-08-10 4/200 2026-08-10 14:50 by 医学老男孩
[基金申请] 8月时间戳变的，举个手。玩一下，释放压力 +11 archvillain 2026-08-04 13/650 2026-08-10 14:41 by seekfind
[基金申请] 好奇怪的filecode +4 布布和一二 2026-08-08 5/250 2026-08-10 14:20 by 冰心玉壶晴
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +5 布布和一二 2026-08-07 5/250 2026-08-09 16:15 by 袁向阳007
[基金申请] 关于filecode，很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制，评价高的钱多评价低的钱少，但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] 求各位大神看下 100+6 hpkpkpkp 2026-08-05 33/1650 2026-08-06 14:49 by zhiyanjiang
[基金申请] 影响面上的因素 +8 布布和一二 2026-08-05 11/550 2026-08-06 10:41 by 宝贝虫子
[基金申请] 好消息？这个有何含义？？？ +8 Tide man 2026-08-05 10/500 2026-08-05 16:14 by xmuxiaoyu
[基金申请] 有没有H口的？有收到消息的吗？ +3 超级海虾 2026-08-04 3/150 2026-08-04 17:26 by 学教育滴
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭