[求助] 做QPCR实验时没有CT值（信号）出现，有哪些可能的原因？

可能原因： （1）反应循环数不够
对策：35个循环以上，可根据实验情况增加循环（如至45cycles），但高于45个循环会增加过多的背景信号。
（2）测荧光信号的步骤有误
对策：一般SG法采用72℃延伸时采集，Taqman法则一般在退火结束时或延伸结束采集信号。
（3）引物或探针降解
对策：可通过PAGE电泳检测其完整性。
（4）引物或探针的设计 如探针高于引物的温度不够，造成探针未杂交上而产物已延伸的情况。
对策：重新设计引物或探针
（5）模板量不足
对策：对未知浓度的样品应从系列稀释样本的最高浓度做起。
（6）模板降解
对策：避免样品制备中杂质的引入及反复冻融的情况。

10楼: Originally posted by 蛋蛋的哥 at 2014-07-08 16:27:43
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