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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » 想用色谱定量癌细胞中的DNA，但有好多问题不懂，请各位前辈帮帮忙吧，实验做不动了
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k1040348263

金虫 (正式写手)

[求助] 想用色谱定量癌细胞中的DNA，但有好多问题不懂，请各位前辈帮帮忙吧，实验做不动了

我想破碎癌细胞，然后定量细胞中的DNA浓度。现在觉得操作有问题，不知得到的DNA是否有损失。首先，我在3000转速（应该不属于小型离心机吧，，个头还挺大，我也不知离心力多少）下，将细胞离心了10分钟，拿出后，离心管的下部有少许白色沉淀，我认为是细胞都离心下来了（不知这时细胞破了吗），然后将培养液吸出，加入了2ml的灭菌水，这时发现水中出现了白色的东西，是细胞膜吗？然后我又在100w的功率下超声了5～6分钟，这时DNA是不是断掉了，那蛋白质与DNA分开了吗？我想将DNA酶解成核苷酸，然后进色谱定量，不知蛋白质或细胞中的其他东西影响吗？不知有没有做过定量细胞中的DNA的，用的什么方法？
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细胞生物学实验经验

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1楼 2014-07-03 17:56:11
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k1040348263

金虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 凌波丽 at 2014-07-03 23:30:36
至于测定DNA样品的浓度，只要用紫外光-可见光分光光度计即可方便测定，用不着色谱，更不用酶切。我实在不懂你的实验设计的理由是什么？

我是想在细胞质这种浑浊体系中直接定量DNA浓度，如果不行，那还是提取出来定量好了。不知医学上有没有在活细胞的情况下，直接用仪器就把浓度测出来了的情况？
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8楼2014-07-04 08:17:56
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
k1040348263: 金币+5, ★★★很有帮助, 非常感谢你，亲。 2014-07-03 21:17:56
今天我是来不及回答你怎么多问题，改日给你一个标准protocol，我现在刚开完会，手里没有，一会去聚餐。

超声肯定是能够粉碎细胞、DNA甚至断裂肽键。

至于蛋白质、DNA和其他细胞成分彼此分开和特异性鉴定都有成熟的试验方法，你可以参考有关细胞生物学和分子生物学实验手册。彻底裂解细胞也可以用SDS。蛋白质、DNA都可以用特异性波长的光谱鉴定纯度和浓度。
蛋白质-DNA形成分子复合体当然会影响DNA酶解，这就是蛋白质-DNA相互作用的研究方法保护法或者组激发的基本原理。

“我想将DNA酶解成核苷酸，然后进色谱定量”--------我不懂你这一部实验的目的，如果想定量确定DNA，提纯DNA之后，用紫外光很易确定其浓度。

问题太多，我改日解答贴资料。
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2楼2014-07-03 18:47:50
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k1040348263

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 凌波丽 at 2014-07-03 18:47:50
今天我是来不及回答你怎么多问题，改日给你一个标准protocol，我现在刚开完会，手里没有，一会去聚餐。

超声肯定是能够粉碎细胞、DNA甚至断裂肽键。

至于蛋白质、DNA和其他细胞成分彼此分开和特异性鉴定都有 ...

别忘了给我一个标准protocol,马上就要放假了，我想快点做实验啊
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3楼2014-07-03 21:19:34
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k1040348263

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 凌波丽 at 2014-07-03 18:47:50
今天我是来不及回答你怎么多问题，改日给你一个标准protocol，我现在刚开完会，手里没有，一会去聚餐。

超声肯定是能够粉碎细胞、DNA甚至断裂肽键。

至于蛋白质、DNA和其他细胞成分彼此分开和特异性鉴定都有 ...

记得尽快给我一个标准protocol好吗，马上就要放假了，我想快点做实验，快些回家。
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4楼2014-07-03 21:22:48
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