| 查看: 1920 | 回复: 29 | |||||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||||
k1040348263金虫 (正式写手)
|
[求助]
想用色谱定量癌细胞中的DNA，但有好多问题不懂，请各位前辈帮帮忙吧，实验做不动了
|
||||
| 我想破碎癌细胞，然后定量细胞中的DNA浓度。现在觉得操作有问题，不知得到的DNA是否有损失。首先，我在3000转速（应该不属于小型离心机吧，，个头还挺大，我也不知离心力多少）下，将细胞离心了10分钟，拿出后，离心管的下部有少许白色沉淀，我认为是细胞都离心下来了（不知这时细胞破了吗），然后将培养液吸出，加入了2ml的灭菌水，这时发现水中出现了白色的东西，是细胞膜吗？然后我又在100w的功率下超声了5～6分钟，这时DNA是不是断掉了，那蛋白质与DNA分开了吗？我想将DNA酶解成核苷酸，然后进色谱定量，不知蛋白质或细胞中的其他东西影响吗？不知有没有做过定量细胞中的DNA的，用的什么方法？ |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 细胞生物学实验经验 |
» 猜你喜欢
基金未中，这种答复是模板吗？
已经有5人回复
-
为什么资助数各大高校都创新高，自己申请怎么就这么难
已经有5人回复
-
有多少人是今天查系统知道结果的？
已经有17人回复
-
导师吐槽：我怎么摊上了这么个极品研究生！
已经有5人回复
-
怎么看青基中了没有啊
已经有5人回复
-
梦想
已经有3人回复
-
面上合作单位盖章
已经有3人回复
-
看板上这么多中的，有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉……
已经有5人回复
-
基金不中，共勉
已经有7人回复
-
为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜？
已经有11人回复
凌波丽
专家顾问 (知名作家)
-
专家经验: +218 - BioEPI: 11
- 应助: 397 (硕士)
- 贵宾: 0.044
- 金币: 2119.9
- 散金: 10
- 红花: 209
- 帖子: 5633
- 在线: 571.6小时
- 虫号: 1766465
- 注册: 2012-04-19
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
- 管辖: 生物科学综合
★ ★ ★
youlinglyw: 金币+3, 赠人玫瑰手有余香，生物科学有你更精彩！ 2014-07-05 02:03:35
youlinglyw: 金币+3, 赠人玫瑰手有余香，生物科学有你更精彩！ 2014-07-05 02:03:35
|
从这上面选一个实验方案提取真核细胞的基因组DNA的实验方案。 分子克隆指南上下册，第三版PDF http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=5864295&fpage=1&target=blank 你这样设计实验没有任何成功的可能。 |
5楼2014-07-03 23:27:34
凌波丽
专家顾问 (知名作家)
-
专家经验: +218 - BioEPI: 11
- 应助: 397 (硕士)
- 贵宾: 0.044
- 金币: 2119.9
- 散金: 10
- 红花: 209
- 帖子: 5633
- 在线: 571.6小时
- 虫号: 1766465
- 注册: 2012-04-19
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
- 管辖: 生物科学综合
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
k1040348263: 金币+5, ★★★很有帮助, 非常感谢你，亲。 2014-07-03 21:17:56
感谢参与，应助指数 +1
k1040348263: 金币+5, ★★★很有帮助, 非常感谢你，亲。 2014-07-03 21:17:56
今天我是来不及回答你怎么多问题，改日给你一个标准protocol，我现在刚开完会，手里没有，一会去聚餐。 超声肯定是能够粉碎细胞、DNA甚至断裂肽键。 至于蛋白质、DNA和其他细胞成分彼此分开和特异性鉴定都有成熟的试验方法，你可以参考有关细胞生物学和分子生物学实验手册。彻底裂解细胞也可以用SDS。蛋白质、DNA都可以用特异性波长的光谱鉴定纯度和浓度。 蛋白质-DNA形成分子复合体当然会影响DNA酶解，这就是蛋白质-DNA相互作用的研究方法保护法或者组激发的基本原理。 “我想将DNA酶解成核苷酸，然后进色谱定量”--------我不懂你这一部实验的目的，如果想定量确定DNA，提纯DNA之后，用紫外光很易确定其浓度。 问题太多，我改日解答贴资料。 |
2楼2014-07-03 18:47:50
k1040348263
金虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1966.8
- 散金: 24
- 帖子: 425
- 在线: 119.9小时
- 虫号: 2787916
- 注册: 2013-11-08
- 性别: MM
- 专业: 药物分析
3楼2014-07-03 21:19:34
k1040348263
金虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1966.8
- 散金: 24
- 帖子: 425
- 在线: 119.9小时
- 虫号: 2787916
- 注册: 2013-11-08
- 性别: MM
- 专业: 药物分析
4楼2014-07-03 21:22:48
