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k1040348263金虫 (正式写手)
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[求助]
想用色谱定量癌细胞中的DNA，但有好多问题不懂，请各位前辈帮帮忙吧，实验做不动了
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| 我想破碎癌细胞，然后定量细胞中的DNA浓度。现在觉得操作有问题，不知得到的DNA是否有损失。首先，我在3000转速（应该不属于小型离心机吧，，个头还挺大，我也不知离心力多少）下，将细胞离心了10分钟，拿出后，离心管的下部有少许白色沉淀，我认为是细胞都离心下来了（不知这时细胞破了吗），然后将培养液吸出，加入了2ml的灭菌水，这时发现水中出现了白色的东西，是细胞膜吗？然后我又在100w的功率下超声了5～6分钟，这时DNA是不是断掉了，那蛋白质与DNA分开了吗？我想将DNA酶解成核苷酸，然后进色谱定量，不知蛋白质或细胞中的其他东西影响吗？不知有没有做过定量细胞中的DNA的，用的什么方法？ |
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 细胞生物学实验经验 |
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k1040348263
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4楼2014-07-03 21:22:48
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【答案】应助回帖
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k1040348263: 金币+5, ★★★很有帮助, 非常感谢你，亲。 2014-07-03 21:17:56
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今天我是来不及回答你怎么多问题，改日给你一个标准protocol，我现在刚开完会，手里没有，一会去聚餐。 超声肯定是能够粉碎细胞、DNA甚至断裂肽键。 至于蛋白质、DNA和其他细胞成分彼此分开和特异性鉴定都有成熟的试验方法，你可以参考有关细胞生物学和分子生物学实验手册。彻底裂解细胞也可以用SDS。蛋白质、DNA都可以用特异性波长的光谱鉴定纯度和浓度。 蛋白质-DNA形成分子复合体当然会影响DNA酶解，这就是蛋白质-DNA相互作用的研究方法保护法或者组激发的基本原理。 “我想将DNA酶解成核苷酸，然后进色谱定量”--------我不懂你这一部实验的目的，如果想定量确定DNA，提纯DNA之后，用紫外光很易确定其浓度。 问题太多，我改日解答贴资料。 |
2楼2014-07-03 18:47:50
k1040348263
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3楼2014-07-03 21:19:34
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从这上面选一个实验方案提取真核细胞的基因组DNA的实验方案。 分子克隆指南上下册，第三版PDF http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=5864295&fpage=1&target=blank 你这样设计实验没有任何成功的可能。 |
5楼2014-07-03 23:27:34
