24小时热门版块排行榜

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

k1040348263

金虫 (正式写手)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 1966.8
散金: 24
帖子: 425
在线: 119.9小时
虫号: 2787916
注册: 2013-11-08
性别: MM
专业: 药物分析

[求助] 想用色谱定量癌细胞中的DNA，但有好多问题不懂，请各位前辈帮帮忙吧，实验做不动了

我想破碎癌细胞，然后定量细胞中的DNA浓度。现在觉得操作有问题，不知得到的DNA是否有损失。首先，我在3000转速（应该不属于小型离心机吧，，个头还挺大，我也不知离心力多少）下，将细胞离心了10分钟，拿出后，离心管的下部有少许白色沉淀，我认为是细胞都离心下来了（不知这时细胞破了吗），然后将培养液吸出，加入了2ml的灭菌水，这时发现水中出现了白色的东西，是细胞膜吗？然后我又在100w的功率下超声了5～6分钟，这时DNA是不是断掉了，那蛋白质与DNA分开了吗？我想将DNA酶解成核苷酸，然后进色谱定量，不知蛋白质或细胞中的其他东西影响吗？不知有没有做过定量细胞中的DNA的，用的什么方法？

回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

细胞生物学实验经验

» 猜你喜欢

上海工程技术大学【激光智能制造】课题组招收硕士已经有6人回复
带资进组求博导收留已经有11人回复
自荐读博已经有5人回复
求个博导看看已经有16人回复
上海工程技术大学张培磊教授团队招收博士生已经有4人回复
求助院士们，这个如何合成呀已经有4人回复
临港实验室与上科大联培博士招生1名已经有9人回复
写了一篇“相变储能技术在冷库中应用”的论文，论文内容以实验为主，投什么期刊合适？已经有6人回复
最近几年招的学生写论文不引自己组发的文章已经有11人回复
中科院杭州医学所招收博士生一名（生物分析化学、药物递送）已经有3人回复

1楼 2014-07-03 17:56:11

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

k1040348263

金虫 (正式写手)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 1966.8
散金: 24
帖子: 425
在线: 119.9小时
虫号: 2787916
注册: 2013-11-08
性别: MM
专业: 药物分析

引用回帖:

2楼: Originally posted by 凌波丽 at 2014-07-03 18:47:50
今天我是来不及回答你怎么多问题，改日给你一个标准protocol，我现在刚开完会，手里没有，一会去聚餐。

超声肯定是能够粉碎细胞、DNA甚至断裂肽键。

至于蛋白质、DNA和其他细胞成分彼此分开和特异性鉴定都有 ...

别忘了给我一个标准protocol,马上就要放假了，我想快点做实验啊

赞一下

回复此楼

3楼2014-07-03 21:19:34

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

查看全部 30 个回答

凌波丽

专家顾问 (知名作家)

专家经验: +218
BioEPI: 11
应助: 397 (硕士)
贵宾: 0.044
金币: 2118.9
散金: 10
红花: 208
帖子: 5633
在线: 571.6小时
虫号: 1766465
注册: 2012-04-19
性别: MM
专业: 生物大分子结构与功能
管辖: 生物科学综合

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
k1040348263: 金币+5, ★★★很有帮助, 非常感谢你，亲。 2014-07-03 21:17:56

今天我是来不及回答你怎么多问题，改日给你一个标准protocol，我现在刚开完会，手里没有，一会去聚餐。

超声肯定是能够粉碎细胞、DNA甚至断裂肽键。

至于蛋白质、DNA和其他细胞成分彼此分开和特异性鉴定都有成熟的试验方法，你可以参考有关细胞生物学和分子生物学实验手册。彻底裂解细胞也可以用SDS。蛋白质、DNA都可以用特异性波长的光谱鉴定纯度和浓度。
蛋白质-DNA形成分子复合体当然会影响DNA酶解，这就是蛋白质-DNA相互作用的研究方法保护法或者组激发的基本原理。

“我想将DNA酶解成核苷酸，然后进色谱定量”--------我不懂你这一部实验的目的，如果想定量确定DNA，提纯DNA之后，用紫外光很易确定其浓度。

问题太多，我改日解答贴资料。

赞一下(2人)

回复此楼

2楼2014-07-03 18:47:50

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖