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李小同

木虫 (小有名气)

[求助] 怎么让质粒丢失 已有2人参与

求助一下各位虫友,我现在有一个菌,里边有两个质粒,分别是卡那霉素抗性和四环素抗性,能通过什么方法让这个四环素抗性的质粒丢失呢?只留下卡那霉素抗性的质粒。
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科学怪人

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-06-26 22:09:00
李小同: 金币+2, 有帮助 2014-06-27 13:57:07
高甘油保存的菌质粒易丢失。
假如是amp抗性的话,划线于抗生素平板,挑单菌,在比正常抗生素浓度稍低的液体培养基中超过20小时长时间摇菌(据文献,假如是amp的话,一般超过12小时,菌中即有一定比例的丢失质粒菌存在,以后随着抗生素失效,这些菌会占优势,其他抗生素就不知道了),取一定量菌液加甘油至50%体积,反复冻融几次,然后划线于无抗生素平板,挑多个单菌于无抗生素培养液中培养,摇浑后保留部分菌液,其余提质粒,对提不出质粒者进行鉴定。鉴定是否是大肠杆菌,鉴定有否抗生素抗性。注重严格无菌操作
只是本人的想法,不知对否,欢迎高手指正。
人生贵在行动,迟疑不决时,不妨先迈出小小一步。
2楼2014-06-26 21:53:56
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淘淘279

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
李小同(kx444555代发): 金币+2, 鼓励交流 2014-06-27 13:51:30
李小同: 金币+2, 有帮助 2014-06-27 13:57:15
在只含卡那霉素的抗性筛选培养基上生长。扩培几代后另一个抗性质粒就丢失了

[ 发自小木虫客户端 ]
你能做的永远不止这些!
3楼2014-06-26 22:40:26
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