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李小同

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[求助] 怎么让质粒丢失已有2人参与

求助一下各位虫友，我现在有一个菌，里边有两个质粒，分别是卡那霉素抗性和四环素抗性，能通过什么方法让这个四环素抗性的质粒丢失呢？只留下卡那霉素抗性的质粒。

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1楼 2014-06-26 17:24:31

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【答案】应助回帖

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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-06-26 22:09:00
李小同: 金币+2, ★有帮助 2014-06-27 13:57:07

高甘油保存的菌质粒易丢失。
假如是amp抗性的话，划线于抗生素平板，挑单菌，在比正常抗生素浓度稍低的液体培养基中超过20小时长时间摇菌（据文献，假如是amp的话，一般超过12小时，菌中即有一定比例的丢失质粒菌存在，以后随着抗生素失效，这些菌会占优势，其他抗生素就不知道了），取一定量菌液加甘油至50%体积，反复冻融几次，然后划线于无抗生素平板，挑多个单菌于无抗生素培养液中培养，摇浑后保留部分菌液，其余提质粒，对提不出质粒者进行鉴定。鉴定是否是大肠杆菌，鉴定有否抗生素抗性。注重严格无菌操作
只是本人的想法，不知对否，欢迎高手指正。