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xiaoyu0127

铜虫 (小有名气)

[求助] 蛋白浓缩,质谱 已有3人参与

打算做某个蛋白的质谱。蛋白纯化后,浓度太低,western可以检测,可是无法考染或者银染看是否纯。请教,如何保持蛋白活性的前提下将目前约4ml的蛋白溶液浓缩至约100微升(用PEG20000已经初步浓缩)。另外,做质谱的话银染考染都可以吧,样品制备有什么要求。跪求大虾指点。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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xiaoyu0127

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 馒头爱生物 at 2014-06-23 15:42:52
蛋白浓缩用3k离心管就可以,时间有点长的话,注意加蛋白酶抑制剂防止降解。
打质谱的话银染考染都可以,不跑胶提供蛋白溶液也可以,但是要提供溶液的成分,方便别人判断应该帮你怎么处理蛋白,因为溶液里很多成分对 ...

看了一下质谱相关帖子,提到银染与质谱不兼容,不是您是否用过银染打质谱的经历
6楼2014-06-24 17:16:44
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anyaxiong

铁杆木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-06-23 08:24:38
用超滤的方法应该没问题,买个超滤管也就100快的样子
爱拼才会赢
2楼2014-06-22 16:40:33
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xiaoyu0127

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by anyaxiong at 2014-06-22 16:40:33
用超滤的方法应该没问题,买个超滤管也就100快的样子

可以控制得到的量吗,一个管子针对同一种样品可以反复使用吗

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
3楼2014-06-23 10:22:05
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馒头爱生物

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
蛋白浓缩用3k离心管就可以,时间有点长的话,注意加蛋白酶抑制剂防止降解。
打质谱的话银染考染都可以,不跑胶提供蛋白溶液也可以,但是要提供溶液的成分,方便别人判断应该帮你怎么处理蛋白,因为溶液里很多成分对质谱有影响,要先处理再进行。
质谱的灵敏度特别高,无论做什么处理,请一定要带口罩和手套,有条件的话带帽子,否则你会在自己的质谱检测报告中看到很多keratin角蛋白的。
4楼2014-06-23 15:42:52
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